紫外分光光度法测定磷的方法，超声波分离
1.原理
食物中的有机物经酸氧化分解，使磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵。 此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成兰色化合物--钼蓝。用分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值，以测定磷的含量。反应式为：
h3po4+12（nh4）3moo4+21hno3→（nh4）3po4·12moo3+21nh4no3+12h2o
2.适用范围
依据中华人民共和国国家标准：gb12393-90， 此方法适用于所有食品及保健品中磷元素含量的测定。
3.仪器
722可见分光光度计
4.试剂
（1） xiao酸（g.r）， 高氯酸（g.r） 硫酸（a.r）
（2） 混合酸消化液：xiao酸+高氯酸 按4+1混合
（3） 15%（v/v）硫酸溶液：取15ml硫酸缓慢加入到80ml水中，并定容至100ml。
（4） 5%（w/v）钼酸铵溶液：取5g钼酸铵，用15%硫酸溶液稀释至100ml。
（5） 对苯二酚溶液：取0.5g对苯二酚于100ml水中，溶解后加一滴浓硫酸。
（6） 20%（w/v）亚硫酸钠溶液（注：此溶液需在每次实验前临时配制）：称取一定量的亚硫酸钠，用蒸馏水溶解即可。
（7） 标准质控物：猪肝粉（国家标准物质研究中心提供），质控物需室温干燥保存。
（8） 国家标准物质中心提供：磷标准储备溶液，浓度为1000μg/ml
（9） 标准中间液的配制：吸取1ml磷标准储备溶液，然后移入100ml容量瓶中，用去离子水定容至100ml ，浓度为10mg/l
5. 操作步骤
5.1样品消化：实验操作需在无元素污染的环境中进行。准确称取样品干样（0.3-0.7g左右）,湿样（1.0g左右）,饮料等其他液体样品 （1.0-2.0g左右）,然后将其放入50ml消化管中, 加混酸15ml（油样或含糖量高的食品可多加些酸）,过夜。次日，将消化管放入消化炉中，消化开始时可将温度调低（约130℃左右），然后逐步将温度调高（zui终调至240℃左右）进行消化，一直消化到样品冒白烟液体变成无色或黄绿色为止。若样品未消化*可再加几毫升混酸，直到消化*。消化完后，待凉，再加5ml去离子水，继续加热，直到消化管中的液体约剩2ml左右，取下，放凉，然后转移至10ml试管中，再用去离子水冲洗消化管2-3次，并zui终定容至10ml。
样品进行消化时，应同时做样品空白消化。
5.2磷标准曲线：分别吸取标准储备液1.0ml、3.0ml、5.0ml至20ml刻度试管中，然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液，加蒸馏水定容至20ml，混匀，静置30分钟，在波长660nm处测定其吸光度，由此计算出回归系数，利用回归方程计算或绘制成校正曲线。
5.3测定：取样品及空白液各2ml分别至20ml试管中，然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液，加蒸馏水定容至20ml，混匀，静置30分钟，在波长660nm处测定其吸光度，并根据测出的吸光度在标准曲线上算得未知溶液中的磷含量。
6.计算
x （mg/100g） = （c∕m ）×（v1∕v2 ）×100
式中：x----样品中磷含量，mg/100g
c----由标准曲线及回归方程算得样品测定液中磷含量，mg
m---称样量 g
v1---消化液定溶总体积，ml
v2-测定用消化液的体积，ml
此元素zui低检出限为2μg
7. 注意事项
（1） 亚硫酸钠溶液每次实验前临时配制，否则可能会使钼蓝溶液发生浑浊。
（2） 其次定容完后，静置时间不亦过长，否则溶液颜色将会加深，其结果不准确。
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h3po4+12（nh4）3moo4+21hno3→（nh4）3po4·12moo3+21nh4no3+12h2o
2.适用范围
依据中华人民共和国国家标准：gb12393-90， 此方法适用于所有食品及保健品中磷元素含量的测定。
3.仪器
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4.试剂
（1） xiao酸（g.r）， 高氯酸（g.r） 硫酸（a.r）
（2） 混合酸消化液：xiao酸+高氯酸 按4+1混合
（3） 15%（v/v）硫酸溶液：取15ml硫酸缓慢加入到80ml水中，并定容至100ml。
（4） 5%（w/v）钼酸铵溶液：取5g钼酸铵，用15%硫酸溶液稀释至100ml。
（5） 对苯二酚溶液：取0.5g对苯二酚于100ml水中，溶解后加一滴浓硫酸。
（6） 20%（w/v）亚硫酸钠溶液（注：此溶液需在每次实验前临时配制）：称取一定量的亚硫酸钠，用蒸馏水溶解即可。
（7） 标准质控物：猪肝粉（国家标准物质研究中心提供），质控物需室温干燥保存。
（8） 国家标准物质中心提供：磷标准储备溶液，浓度为1000μg/ml
（9） 标准中间液的配制：吸取1ml磷标准储备溶液，然后移入100ml容量瓶中，用去离子水定容至100ml ，浓度为10mg/l
5. 操作步骤
5.1样品消化：实验操作需在无元素污染的环境中进行。准确称取样品干样（0.3-0.7g左右）,湿样（1.0g左右）,饮料等其他液体样品 （1.0-2.0g左右）,然后将其放入50ml消化管中, 加混酸15ml（油样或含糖量高的食品可多加些酸）,过夜。次日，将消化管放入消化炉中，消化开始时可将温度调低（约130℃左右），然后逐步将温度调高（zui终调至240℃左右）进行消化，一直消化到样品冒白烟液体变成无色或黄绿色为止。若样品未消化*可再加几毫升混酸，直到消化*。消化完后，待凉，再加5ml去离子水，继续加热，直到消化管中的液体约剩2ml左右，取下，放凉，然后转移至10ml试管中，再用去离子水冲洗消化管2-3次，并zui终定容至10ml。
样品进行消化时，应同时做样品空白消化。
5.2磷标准曲线：分别吸取标准储备液1.0ml、3.0ml、5.0ml至20ml刻度试管中，然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液，加蒸馏水定容至20ml，混匀，静置30分钟，在波长660nm处测定其吸光度，由此计算出回归系数，利用回归方程计算或绘制成校正曲线。
5.3测定：取样品及空白液各2ml分别至20ml试管中，然后依次加入2ml钼酸铵溶液、1ml亚硫酸钠溶液、1ml对苯二酚溶液，加蒸馏水定容至20ml，混匀，静置30分钟，在波长660nm处测定其吸光度，并根据测出的吸光度在标准曲线上算得未知溶液中的磷含量。
6.计算
x （mg/100g） = （c∕m ）×（v1∕v2 ）×100
式中：x----样品中磷含量，mg/100g
c----由标准曲线及回归方程算得样品测定液中磷含量，mg
m---称样量 g
v1---消化液定溶总体积，ml
v2-测定用消化液的体积，ml
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