Kromasil液相色谱柱冲洗与维护

液相色谱柱是色谱分析中关键的耗材之一，色谱柱的状态对实验结果影响也是有所影响。日常分析时色谱柱的污染却在所难免。色谱柱被污染后，通常会导致一系列的分析问题，比如压力高、基线不稳、峰型差等。此时正确的冲洗和维护色谱柱就显得十分重要了。
一、柱体积的计算
我们在一些冲洗方法的资料中，经常会看到10倍柱体积或者20倍柱体积的说法。那么柱体积应该如何计算呢？我们可以把色谱柱想象为一个圆柱形，因此可以参考圆柱形计算公式。
v=πr2l
v=色谱柱体积(ml) r=色谱柱半径(cm) l= 色谱柱长度(cm)
常规250*4.6mm的规格，柱体积经计算为4.15ml，以1ml/min的流速10倍柱体积就是42min左右。以下是一些常见规格的柱体积值，可作为参考。
二、kromasil反相c18柱的冲洗
反相c18柱是我们日常实验中应用广泛的固定相之一，首先我们先从反相c18柱的常见情况冲洗进行介绍，分别是：一般污染的冲洗、使用缓冲盐后的冲洗、生物样品分析后的冲洗。
1、一般污染的冲洗
一般污染是指的是我们每次分析使用后常见的污染情况，例如试剂和样品杂质对色谱柱产生的污染，或者是一些聚合物的形成等。
① 高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）冲洗10倍柱体积。这样可以将残留在色谱柱中的缓冲盐和一些极性化合物冲洗干净；
② 高比例的有机相（例如：80%甲醇/乙腈-水溶液）冲洗10-20倍柱体积。高比例有机相可以将一些疏水性的杂质冲洗干净；
③ 如果执行上述冲洗之后还是污染问题没有被解决，可以选择异丙醇冲洗10-20倍柱体积。
2、使用缓冲盐后的冲洗
流动相中时常会加入一些缓冲盐，这些缓冲盐可能会在色谱柱中析出，导致柱压升高等问题，影响后续使用。
① 开启柱温箱，高比例的水相（例如：10%甲醇/乙腈-水溶液）冲洗20倍柱体积；
② 以未加入缓冲盐的方法起始比例流动相进行平衡。
3、生物样品污染
生物分析实验中，通常前处理较为复杂，导致样品无法处理干净。可能会残留小分子肽等物质，其会吸附在色谱柱的管壁或者筛板上，造成柱压高、峰型差、分离度降低等问题。
① 在流动相的有机相中加入0.1%的三氯乙酸，以增强对吸附蛋白质的洗脱；
② 如果问题仍未解决，可尝试在色谱柱里面进100ul三氮乙醇，尝试清洗强保留的蛋白
三、kromasil色谱柱冲洗指南
关于其他常见色谱柱的冲洗方法，可按照以下提示进行尝试，若使用其他品牌的色谱柱请和厂商工程师确认后进行参考。
1、反相柱的冲洗
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗
① 90%水-乙睛溶液
② 100%四氢呋喃
③ 95%乙腈-水溶液
④ 不含盐的初始比例流动相
⑤ 初始比例流动相平衡
2、正相柱的冲洗-硅胶柱
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗
① 异丙醇
② 甲醇
③ 乙酸乙酯
④ 流动相
3、正相柱的冲洗-氰基柱、二元醇基柱
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗
① 三氯甲烷
② 异丙醇
③ 二氯甲烷
④ 流动相
色谱柱污染在日常分析中在所难免，因此可以考虑购买kromasil保护柱来进行预防。kromasil保护柱采用分析柱相同填料填充，不增加死体积与不改变分离的同时，可以有效保护分析柱，延长使用寿命。
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