液相分析常见问题⑥ 峰面积变来变去无法定量
峰面积是定量分析的基础，峰面积的变化会导致精密度、标曲、定量分析等一系列问题。
那么，如果遇到峰面积不稳定的情况，我们要怎么办？让我们分三种情况分别来看一看：
一、峰面积变小
1. 仪器漏液
仪器漏液会导致样品损失，与正常测定结果相比，会出现色谱峰减小的情况。
→这种时候，需要检查系统压力，确保所有螺丝或连接处无漏液情况，排查仪器方面的原因。
2. 样品稳定性不好
有些样品自身稳定性不好，配置后，随着进样时间的推移会出现降解现象。
→如果连续进样过程中，主峰的峰面积减小，同时伴随杂质峰面积增加的情况，建议确认样品在溶剂或流动相中的稳定性情况。
3. 进样瓶中样品量过少
当样品瓶中样品过少可能导致进样针未吸取到足够样品进样。
→添加样品或使用内衬管即可解决。
4. 针峰面积减小
进样瓶的瓶盖拧紧后，瓶内会出现负压，可能导致进样器取样不准确。
→第二次进样时，由于瓶盖已经有孔，负压消除后进样峰面积会恢复正常；也可通过使用预开口进样小瓶来解决该类问题。
二、峰面积变大
可能是由于色谱柱或流动相条件导致样品吸附，特别是一些带电荷情况较为复杂的蛋白或多肽类样品。
→大浓度进样、平衡可能的吸附位点
→更换色谱柱或优化方法
（*更换mg、mgii、或proteonavi进行尝试）
▲capcell pak 聚合物包被结构示意图
proteonavi
proteonavi是采用在多孔球形硅胶填料表面键合丁基（c4）的高性能蛋白质•多肽分析色谱柱。该填料既具有硅胶类填料的高分离能力和耐压性，又具有耐酸性、抑制蛋白质吸附等特长。
★ 具备优越的耐酸性
★填料表面的蛋白吸附，即使样品量少也能被检出
★ 可对应从分析到制备的规模扩大化
三、峰面积忽大忽小，变化无规律
1. 自动进样器故障或混入气泡
→进样过程中，观察进样针中无气泡混入，如果自动进样器出现故障，需要咨询相应品牌仪器工程师。
2. 样品过于黏稠会导致进样不准确
→稀释样品通常可以解决
3. 进样瓶中混入气泡
→部分样品容易混入气泡，比如一些表面活性剂类样品，观察进样瓶中是否有小气泡，或者对进样瓶进行超声脱气。
ps: 以上对策主要针对液相分析检测中出现峰面积不稳的情况，如果在质谱分析中出现峰面积不稳，则可能会有离子化、基质效应等其他原因。
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那么，如果遇到峰面积不稳定的情况，我们要怎么办？让我们分三种情况分别来看一看：
一、峰面积变小
1. 仪器漏液
仪器漏液会导致样品损失，与正常测定结果相比，会出现色谱峰减小的情况。
→这种时候，需要检查系统压力，确保所有螺丝或连接处无漏液情况，排查仪器方面的原因。
2. 样品稳定性不好
有些样品自身稳定性不好，配置后，随着进样时间的推移会出现降解现象。
→如果连续进样过程中，主峰的峰面积减小，同时伴随杂质峰面积增加的情况，建议确认样品在溶剂或流动相中的稳定性情况。
3. 进样瓶中样品量过少
当样品瓶中样品过少可能导致进样针未吸取到足够样品进样。
→添加样品或使用内衬管即可解决。
4. 针峰面积减小
进样瓶的瓶盖拧紧后，瓶内会出现负压，可能导致进样器取样不准确。
→第二次进样时，由于瓶盖已经有孔，负压消除后进样峰面积会恢复正常；也可通过使用预开口进样小瓶来解决该类问题。
二、峰面积变大
可能是由于色谱柱或流动相条件导致样品吸附，特别是一些带电荷情况较为复杂的蛋白或多肽类样品。
→大浓度进样、平衡可能的吸附位点
→更换色谱柱或优化方法
（*更换mg、mgii、或proteonavi进行尝试）
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★ 具备优越的耐酸性
★填料表面的蛋白吸附，即使样品量少也能被检出
★ 可对应从分析到制备的规模扩大化
三、峰面积忽大忽小，变化无规律
1. 自动进样器故障或混入气泡
→进样过程中，观察进样针中无气泡混入，如果自动进样器出现故障，需要咨询相应品牌仪器工程师。
2. 样品过于黏稠会导致进样不准确
→稀释样品通常可以解决
3. 进样瓶中混入气泡
→部分样品容易混入气泡，比如一些表面活性剂类样品，观察进样瓶中是否有小气泡，或者对进样瓶进行超声脱气。
ps: 以上对策主要针对液相分析检测中出现峰面积不稳的情况，如果在质谱分析中出现峰面积不稳，则可能会有离子化、基质效应等其他原因。
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