HumanIL-17ELISAKit
human il-17 elisa kit
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心elisa法。用抗人il-17抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中
的人il-17会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入*化的抗人il-17抗体和辣根过
氧化物酶标记的亲和素。抗人il-17抗体与结合在包被抗体上的人il-17结合、*与亲和素特
异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(tmb)，tmb在辣根过氧化物酶
的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测od值，il-17浓度与od450
值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中il-17的浓度。
human il-17elisa kit
样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用edta-na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的pbs (0.01m, ph=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果)，称重后将*碎。将剪碎的组织与对应体积的pbs(一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9ml的pbs，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在pbs中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组
织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，
取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
human il-17elisa kit
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(6个月内检测)，避免反复冻融。
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先
做预实验，以确定稀释倍数)。
human il-17elisa kit
试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，ep管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0ml至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀(浓度为2000pg/ml)。
然后根据需要进行倍比稀释(注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓
度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/ml，标准品&样品稀释液直接作为空
白孔0pg/ml。如配制1000pg/ml标准品：取0.5ml2000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml标
准品&样品稀释液的ep管中，混匀即可，其余浓度依此类推。
human il-17elisa kit
4. *化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配
制100-200μl。使用前15分钟，以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作
浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制
100-200μl。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩hrp酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
标准品稀释方法图例：(以500μl/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μl/管)
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的人il-17会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入*化的抗人il-17抗体和辣根过
氧化物酶标记的亲和素。抗人il-17抗体与结合在包被抗体上的人il-17结合、*与亲和素特
异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(tmb)，tmb在辣根过氧化物酶
的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测od值，il-17浓度与od450
值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中il-17的浓度。
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样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集
血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用edta-na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可
检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的pbs (0.01m, ph=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会
影响测量结果)，称重后将*碎。将剪碎的组织与对应体积的pbs(一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9ml的pbs，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在pbs中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组
织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，
取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
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6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
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8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先
做预实验，以确定稀释倍数)。
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试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，ep管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超
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3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0ml至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀(浓度为2000pg/ml)。
然后根据需要进行倍比稀释(注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓
度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/ml，标准品&样品稀释液直接作为空
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4. *化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配
制100-200μl。使用前15分钟，以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作
浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制
100-200μl。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩hrp酶结合物(1:100)成工作浓度。
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