抗体纯化有难题，月旭科技有利器
单克隆抗体（简称单抗）广泛用于疾病的诊断、预防和治疗。自1986年shou个单抗药物上市以来，已有近40种单抗药物上市，还有300多种单抗处于临床研究中。单抗药物已成为发展zui快的药物领域之一。
在单抗药物的生产过程中，对分离纯化工艺的效率和成本的要求非常高，单抗的分离纯化成本通常可占其生产成本的50-70%。protein a亲和介质是抗体分离纯化关键的材料，其性能和成本决定了单抗产品的纯度和收率和成本。
目前，绝大多数的抗体igg分子纯化使用protein a亲和层析。protein a是*表面的蛋白，分子量42kda，有5个不同的结构域可以结合igg的fc片段，具有很强的特异性亲和力，每个protein a分子至少可以结合两个抗体igg分子。
protein a tanrose4ff
protein a tanrose 4ff 是用于分离和纯化单克隆抗体、多克隆抗体或 fc-融合标签的通用性亲和层析介质，proteina 有五个igg结合区域和一些未知功能的区域，重组protein a去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五个 igg 结合区域，减少了非特异性吸附。
protein a tanrose 4ff是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化，被工业客户普遍接受。
缓冲液准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。
平衡/ 洗杂液:20mm na₂ hpo₄ , 0.15m nacl, ph7.0；
洗脱液:0.1m *，ph3.0；
中和液：1m tris-hcl，ph8.5。
样品纯化
protein a tanrose 4ff 装填好后，可以用各种常规的中低压色谱系统。
🔸 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
🔸 用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
🔸 使用至少 5 倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
🔸 利用泵或样品环上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
🔸 用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积）。
🔸 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
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protein a tanrose 4ff是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化，被工业客户普遍接受。
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平衡/ 洗杂液:20mm na₂ hpo₄ , 0.15m nacl, ph7.0；
洗脱液:0.1m *，ph3.0；
中和液：1m tris-hcl，ph8.5。
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🔸 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
🔸 用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
🔸 使用至少 5 倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
🔸 利用泵或样品环上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
🔸 用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积）。
🔸 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。洗脱组分需要立即调成中性，一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
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