化脓放线菌PCR定量试剂盒试剂配制
化脓放线菌pcr定量试剂盒组成及试剂配制:
1、酶标板：一块(96孔)
2、 标准品(冻干品)： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 u/l，然后做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别配制成200 u/l，100 u/l，50 u/l，25 u/l，12.5 u/l，6.25 u/l，3.12 u/l，样品稀释液直接作为空白孔 0 u/l。如配制100 u/l标准品：取0.3ml (不要少于0.3ml )200 u/l的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液a：1×10ml。
5、 检测稀释液b：1×10ml。
应五要素：
衣氏放线菌pcr检测试剂盒参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
注意事项：
5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
5.2 操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、pcr扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 5.3 实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀(混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀)。
5.4 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上pcr仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5.5细胞培养物中含有*和*等抗*不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测。
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1、酶标板：一块(96孔)
2、 标准品(冻干品)： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 u/l，然后做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别配制成200 u/l，100 u/l，50 u/l，25 u/l，12.5 u/l，6.25 u/l，3.12 u/l，样品稀释液直接作为空白孔 0 u/l。如配制100 u/l标准品：取0.3ml (不要少于0.3ml )200 u/l的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液a：1×10ml。
5、 检测稀释液b：1×10ml。
应五要素：
衣氏放线菌pcr检测试剂盒参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
注意事项：
5.1使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
5.2 操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、pcr扩增应分区域进行，以避免交叉污染。 5.3 实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀(混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀)。
5.4 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上pcr仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5.5细胞培养物中含有*和*等抗*不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测。
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