脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。为达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织中的抗原不被破坏,需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙,然后再行常规制片chemicalbook。dta脱钙液与羟基磷灰石结晶的外层钙结合,形成可溶性的非离子化合物,同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解,且ph中性时可起螯合作用。edta脱钙液的操作步骤:
1、骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约 5mm。
2、组织固定后,用 pbs 清洗 3 次,每次 20min。
3、组织用蒸馏水洗清洗 3 次,每次 20min。
4、组织转移 20~30 倍体积的 edta脱钙液中,脱钙 10~30 天或更长时间。如果想加快脱钙速度,可以置于 37℃进行脱钙。如果必要,更换新的 edta 脱钙液继续脱钙,多数组织脱钙 2 周~3 个月即可,每周更换一次,直终点。亦可采用微波快速脱钙法:微波炉设在 200w 左右的档位,每次加热 5min,依据组织厚度和密度重复 3~5min,中间间隔 3~5min。
5、用蒸馏水冲洗数次。
6、常规脱水、包埋。
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