本生阐述:elisa方法如何检测带抗体的相关指标
在运用elisa方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白igg、igm),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,其结果可用目测或用分光光度计定量测定。
elisa试剂盒操作步骤:
1. 将抗原按5μg/ml稀释于碳酸盐缓冲液(ph 9.6),100μl /孔,4℃过夜。
2. 次日pbs-t清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。
3. 加2%bsa封闭室温1h,200μl /孔。
4. 阳性对照从10ug/ml,做倍必稀释,待测血清从1:50做倍比稀释,预试验后确定稀释倍数及阳性对照的起始浓度及稀释数量(以可以做标准曲线为参数),室温1h。
5. pbs-t清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。
6. 加入1:3000(不同公司有不同的推荐稀释度)pbs-t稀释的hrp标记的山羊抗人igg,100μl /孔,室温1h。
7. pbs-t清洗4次(快1慢3,间隔5分钟)。
8. 显色,100μl /孔,颜色变深后中止显色,2m硫酸在bio-rad酶标仪上读数,可用abts,opd,tmb等。
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