《葡萄植株中7种植物激素含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》团体标准征求意见
根据《中华人民共和国标准法》文件精神，由广西大学、广西西大检测有限公司、广西亚热带作物研究所、广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西思浦林科技有限公司共同起草的《葡萄植株中7种植物激素含量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》征求意见稿已完成，依据《团体标准管理规定》和《广西农产品质量安全服务协会团体标准管理办法》的有关规定，现向社会公开征求意见。
本文件按照gb/t 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件描述了液相色谱-质谱/质谱法测定葡萄植株中7种植物内源激素含量的原理，规定了试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和表述、精密度等的要求。
本标准适用于葡萄植株的叶、芽、果等组织中玉米素、玉米素核苷、赤霉素a3、生长素、水杨酸、茉莉酸、脱落酸含量的测定。
原理：
试样用异丙醇混合溶液低温震荡提取植物激素，经反相色谱柱分离，液相色谱-质谱/质谱法进行测定，外标法定量。
仪器和设备：
1.液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(esi)。
2.电子天平：感量0.1mg。
3.涡旋混匀器。
4.低温震荡仪：温度可至5℃。
5.超低温冰箱：温度可至-80℃。
6.氮吹仪。
样品制备：
分别取新鲜的葡萄植株的叶、芽、果等部位供试样，迅速用超纯水洗净样品附着的杂物，表面水分用吸水纸擦干，立即保存于液氮中。将样品从液氮中取出，置于研钵中加液氮磨细，混匀，立即转移至-80 ℃冰箱避光保存。
试样处理：
称取0.2g(精确至0.1mg)制备好的试样于15ml 塑料离心管中，加入2ml 预冷(4 ℃)的提取剂(5.5)，置于5℃震荡仪中以200r/min 振荡1h，再加入4ml 预冷(4 ℃)的二氯甲烷(5.3)，继续震荡1h，取二氯甲烷层氮吹至近干。加入0.5ml 预冷(4 ℃)的50%甲醇溶液(5.6)复溶，漩涡混匀，经0.22μm 滤膜过滤，滤液供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
液相色谱参考条件：
a)色谱柱：beh c18柱，2.1 mm × 100mm，粒度1.7 μm，或性能相当者；
b)流动相：流动相a为0.1%甲酸水溶液，流动相b为甲醇，梯度洗脱程序见表1；
c)流速：0.3ml/min；
d)柱温：40 ℃；
e)进样量：5μl。
质谱参考条件：
a)离子源：esi源；
b)扫描方式：正离子扫描模式和负离子扫描模式(参见附录b)；
c)检测方式：多反应监测(mrm)；
d)干燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录b；
e)监测离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度，参考条件参见附录b。
精密度：
1.在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。
2.在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的20%。
更多详情请见附件。
相关资料下载： 征求意见稿文本.pdf 征求意见稿编制说明.pdf 征求意见表.pdf
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本文件按照gb/t 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件描述了液相色谱-质谱/质谱法测定葡萄植株中7种植物内源激素含量的原理，规定了试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、结果计算和表述、精密度等的要求。
本标准适用于葡萄植株的叶、芽、果等组织中玉米素、玉米素核苷、赤霉素a3、生长素、水杨酸、茉莉酸、脱落酸含量的测定。
原理：
试样用异丙醇混合溶液低温震荡提取植物激素，经反相色谱柱分离，液相色谱-质谱/质谱法进行测定，外标法定量。
仪器和设备：
1.液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(esi)。
2.电子天平：感量0.1mg。
3.涡旋混匀器。
4.低温震荡仪：温度可至5℃。
5.超低温冰箱：温度可至-80℃。
6.氮吹仪。
样品制备：
分别取新鲜的葡萄植株的叶、芽、果等部位供试样，迅速用超纯水洗净样品附着的杂物，表面水分用吸水纸擦干，立即保存于液氮中。将样品从液氮中取出，置于研钵中加液氮磨细，混匀，立即转移至-80 ℃冰箱避光保存。
试样处理：
称取0.2g(精确至0.1mg)制备好的试样于15ml 塑料离心管中，加入2ml 预冷(4 ℃)的提取剂(5.5)，置于5℃震荡仪中以200r/min 振荡1h，再加入4ml 预冷(4 ℃)的二氯甲烷(5.3)，继续震荡1h，取二氯甲烷层氮吹至近干。加入0.5ml 预冷(4 ℃)的50%甲醇溶液(5.6)复溶，漩涡混匀，经0.22μm 滤膜过滤，滤液供液相色谱-质谱/质谱仪测定。
液相色谱参考条件：
a)色谱柱：beh c18柱，2.1 mm × 100mm，粒度1.7 μm，或性能相当者；
b)流动相：流动相a为0.1%甲酸水溶液，流动相b为甲醇，梯度洗脱程序见表1；
c)流速：0.3ml/min；
d)柱温：40 ℃；
e)进样量：5μl。
质谱参考条件：
a)离子源：esi源；
b)扫描方式：正离子扫描模式和负离子扫描模式(参见附录b)；
c)检测方式：多反应监测(mrm)；
d)干燥气、雾化气、碰撞气均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录b；
e)监测离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度，参考条件参见附录b。
精密度：
1.在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。
2.在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的20%。
更多详情请见附件。
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