DNA质粒提取的原理是什么？
在没有质粒提取试剂盒之前，大多提取质粒都是自己配置试剂来提取大肠杆菌中的质粒。现在的试剂盒只是改了一个名字而已，试剂还是那几个试剂。用的原理还是那个原理：碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。那么你知道dna质粒提取的原理是什么吗？让我们一起来看看吧！
一、为什么用无水乙醇沉淀dna？
用无水乙醇沉淀dna，这是实验中常用的沉淀dna的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇不与核酸起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易亍聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与dna相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而dna在溶液中有一定程度的溶解，因而dna损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀dna时可用95％乙醇代替无水乙醇，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀dna。一般在室温下放置15－30分钟即可。
二、在用乙醇沉淀dna时，为什么一定要加naac或nacl至最终浓度达0.1～0.25mol/l？
在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，使na+中和dna分子上的负电荷，减少dna分子之间的同性电荷相斥力，易互相聚合而形成dna钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分dna形成dna钠盐而聚合，这样就造成dna沉淀不wan全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的dna中，由于过多的盐杂质存在，影响dna的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
三、加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用sds与kac来处理？
加进去的rnase本身是一种蛋白质，为了纯化dna，又必须去除之，加sds可使它们成为sds-蛋白复合物沉淀，再加kac使这些复合物转发为溶解度更小的钾盐形式的sds-蛋白质复合物，使沉淀更加wan全。也可用饱和酚、氯仺抽提再沉淀，去除rnase。在溶液中，有人以kac代替naac，也可以收到较好效果。
更多有关dna质粒提取原理的问题，请联系zymo试剂盒代理商——北京百奥创新科技有限公司：
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一、为什么用无水乙醇沉淀dna？
用无水乙醇沉淀dna，这是实验中常用的沉淀dna的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇不与核酸起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易亍聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与dna相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而dna在溶液中有一定程度的溶解，因而dna损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀dna时可用95％乙醇代替无水乙醇，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀dna。一般在室温下放置15－30分钟即可。
二、在用乙醇沉淀dna时，为什么一定要加naac或nacl至最终浓度达0.1～0.25mol/l？
在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，使na+中和dna分子上的负电荷，减少dna分子之间的同性电荷相斥力，易互相聚合而形成dna钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分dna形成dna钠盐而聚合，这样就造成dna沉淀不wan全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的dna中，由于过多的盐杂质存在，影响dna的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
三、加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用sds与kac来处理？
加进去的rnase本身是一种蛋白质，为了纯化dna，又必须去除之，加sds可使它们成为sds-蛋白复合物沉淀，再加kac使这些复合物转发为溶解度更小的钾盐形式的sds-蛋白质复合物，使沉淀更加wan全。也可用饱和酚、氯仺抽提再沉淀，去除rnase。在溶液中，有人以kac代替naac，也可以收到较好效果。
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