qPCR技术如何在『支原体检测』中大显神通？
无论是欧洲药典、日本药典、还是中国药典，均对细胞相关的临床项目有明确的支原体检测指标的要求。药典中还指出，核酸法经过方法学验证后，可替代传统的培养法与指示细胞法进行检测。
part.01
qpcr检测支原体的技术原理
通过扩增高度保守的rrna操纵子，或者更准确地说，扩增支原体基因组中的16s rrna编码区，可以特异性地检测支原体。在fam通道检测支原体特异性扩增片段。在hex通道检测内部扩增对照的扩增。它能特异性检测所有导致细胞污染的柔膜体物种。真核dna不会被扩增。通过内部对照，可检测pcr抑制剂的存在或不正确的dna提取引起的假阴性结果。
样本通常为细胞培养上清液，如检测其他组织或细胞样本，需要对样本进行额外的处理，例如蛋白酶消化等过程。检测程序通常可在3小时内完成。
part.02
qpcr用于支原体检测的优势
快速简便
与动辄30天起步的传统培养法相比，qpcr技术的反应时间相对较短，通常在几小时内就可以完成，大大缩短了用于检测对的时间成本。
灵敏度高
qpcr技术可以在非常低的病原体浓度下进行检测，这种高灵敏度使得qpcr能够有效地检测细胞培养体系、实验或生产流程中，是否发生支原体污染，即使在污染的早期阶段，也能够得到准确的结果。
并且配合灵敏度标准品，进行灵敏度的验证，进一步完善方法学验证的流程。
以德国minerva biolabs公司的venor gem qep为例，检测限可达到≤10cfu/ml。
特异性强
qpcr技术可以使用特异性引物和探针来选择性地扩增目标支原体的dna序列。通过设计引物和探针与目标序列高度匹配，可以避免非特异性扩增产物的产生，从而提高检测的特异性。
以德国minerva biolabs公司的venor gem qep为例，一次检测即可涵盖所有常见易感染细胞的支原体物种（包括欧洲药典规定的9种支原体）。与细菌和真核dna无交叉反应。
定量能力
与传统的pcr技术相比，qpcr可以提供定量信息。通过利用荧光探针或dna染料，可以实时监测pcr反应过程中的荧光信号强度，从而得到目标序列的定量结果。这种定量能力使得qpcr技术在支原体载量的测定和污染进程的监测中非常有用。
part.03
支原体检测试剂盒
德国mb公司生产的支原体qpcr检测试剂盒（均为探针法检测）：venor gem qep，有以下优点：
①遵循欧洲药典流程要求
②高特异性。一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。操作简单，易于观察（使用mb的试剂盒，多种支原体物种均为阳性，其他微生物或真核细胞均为阴性，无交叉反应）。
③高灵敏度。mb公司的支原体qpcr检测试剂盒经典法检测限可达到≤10cfu/ml。
④各类标准品配套齐全
10cfu/100cfu的敏感度测试的标准品，便于方法学验证。
支原体基因组dna和细菌基因组dna，便于特异性验证。
支原体绝对定量标准品，便于最后定量检测。
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样本通常为细胞培养上清液，如检测其他组织或细胞样本，需要对样本进行额外的处理，例如蛋白酶消化等过程。检测程序通常可在3小时内完成。
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快速简便
与动辄30天起步的传统培养法相比，qpcr技术的反应时间相对较短，通常在几小时内就可以完成，大大缩短了用于检测对的时间成本。
灵敏度高
qpcr技术可以在非常低的病原体浓度下进行检测，这种高灵敏度使得qpcr能够有效地检测细胞培养体系、实验或生产流程中，是否发生支原体污染，即使在污染的早期阶段，也能够得到准确的结果。
并且配合灵敏度标准品，进行灵敏度的验证，进一步完善方法学验证的流程。
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特异性强
qpcr技术可以使用特异性引物和探针来选择性地扩增目标支原体的dna序列。通过设计引物和探针与目标序列高度匹配，可以避免非特异性扩增产物的产生，从而提高检测的特异性。
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定量能力
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德国mb公司生产的支原体qpcr检测试剂盒（均为探针法检测）：venor gem qep，有以下优点：
①遵循欧洲药典流程要求
②高特异性。一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。操作简单，易于观察（使用mb的试剂盒，多种支原体物种均为阳性，其他微生物或真核细胞均为阴性，无交叉反应）。
③高灵敏度。mb公司的支原体qpcr检测试剂盒经典法检测限可达到≤10cfu/ml。
④各类标准品配套齐全
10cfu/100cfu的敏感度测试的标准品，便于方法学验证。
支原体基因组dna和细菌基因组dna，便于特异性验证。
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