本生快讯:elisa原理和具体试验方法以及结果处理?
elisa检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的hev多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型hev毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在hev igm抗体,这些抗体就会与hev 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人igm-hrp(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的hev igm抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入tmb底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有hev igm抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量o.d.值,按照本hev igm抗体elisa试剂盒 的测试标准, o.d.值大于或等于cut-off值的样品被认为是初试阳性操作步骤:
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-hrp,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物a、b各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的od值。
elisa试剂盒结 果 判 断 与 分 析:
1、 仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的od值
2、 以吸光度od值为纵坐标(y),相应的s-100b标准品浓度为横坐标(x),做得相应的曲线,样品的s-100b含量可根据其od值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的od值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3、 检测值范围: 0-200ng/ml
4、 敏感度:1.0ng/ml
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