信帆生物细说：T细胞亚群检测试剂盒的样本制备方法以及操作步骤
信帆生物细说：t细胞亚群检测试剂盒的样本制备方法以及操作步骤
信帆生物供应t细胞亚群检测试剂盒，可以用于检测cd3,cd4,cd8,试剂盒配抗体，试剂盒操作简单，资料稳定，深受广大用户青睐，欢迎大家咨询！
t 细胞亚群检测试剂盒说明书
一：试剂盒组成：
1.防脱片剂2ml
2.固定液10ml
3.a 小鼠抗人 cd3 单抗1ml
b 小鼠抗人 cd4 单抗1ml
c 小鼠抗人 cd8 单抗1ml
4.生物素标记羊抗小鼠 igg（ igg/bio）1.5ml × 2
5.碱性磷酸酶标记链霉卵白素(s-a/ap)1.5ml × 2
6.a 底物增强剂（40×)200μl
b 底物液（40×)200μl
c 底物缓冲液（10×)800μl
7.细胞核复染液5ml
8.封片剂1ml
9.记号笔1 支
10.pbs2 包(1000ml)
二：标本制备：
取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血 1～2ml，pbs 稀释 1-2 倍后，沿装有等量淋巴
细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000
转/分）15-20 分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加 5 倍 pbs，离心（1000
转/分）5 分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流
液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴 30μl 细胞悬液于载玻片上，
静置 2 分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或 37℃温箱 1 小时
烤干。或用 pbs 将单个核细胞调至 2×105个/ml，离心涂片机 1000 转离心 1-2
分钟制片，快速吹干或 37℃温箱 1 小时烤干。涂片前取防脱片剂 5-10μl 均匀
推片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以
防掉片。
三：显色剂的配制：
分别取 a 液 25ul，b 液 25ul 置于干净试管中混匀，室温放置 2-5 分钟，加 1ml
蒸馏水，混匀，再加 c 液 100ul 待用。
*使用前，根据所需显色剂用量，按照以上比例现配现用。
四：标本染色：
1. 充分干燥（室温 2 小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画
圈，然后滴加固定液 50μl，室温静置 2-3 分钟，用 pbs 淋洗，擦干玻片背面及
细胞外的 pbs。
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人 cd3、cd4、cd8 单抗适量(10-30μl）,4℃过夜，pbs 淋洗 3 次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠 igg 适量（10-30μl），37℃孵育 30-45 分钟，pbs
淋洗 3 次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育 30-45 分钟，pbs
淋洗 3 次。
5. 滴加显色剂 30-50μl，室温显色 20-40 分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜
上出现红色标记物时，用 pbs 淋洗。
6. 滴加细胞核复染液 30-50μl，30 秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。
五：观察：
高倍镜下选取染色好的视野记数 100-200 个单个核细胞，细胞表面有红色标记物
为阳性细胞。算出阳性率。
六：正常参考值：
正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：cd3，60-80%；cd4，35-55%；cd8，
20-30%；cd4/cd8 的比值在 1.5-2.0 范围内。
七：储存条件及有效期：
2-8℃保存，禁止冷冻，有效期为 12 个月。有效期内可在 0-25℃范围内七天短
时运输。使用时应及时及拿及用，使用后应立即放回冰箱。生产日期，使用期限
或失效日期见标签。
八：注意事项：
1. 免疫细胞化学检测是一种包含多步骤的检测方法，试剂的选择、样本的处理、
涂片的制备、染色及其结果的判读均需要进行专业的培训。
2. 任何阳性或阴性的解读，应由病理科医生结合病理形态学，临床表现及其它
检测方法进行，不作为单独的诊断指标。
3. 复染过度或不足都可能影响结果的判读。
4. 阴性结果表示未检出抗原，不一定表示样本中无该抗原存在，待测抗原编码
基因变异，抗原低表达或抗原修复不当等，都会造成抗原无法检出。
5. 本试剂仅对经处理的人外周血细胞进行验证，不做其他用途
6. 试剂盒使用中，应有适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
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一：试剂盒组成：
1.防脱片剂2ml
2.固定液10ml
3.a 小鼠抗人 cd3 单抗1ml
b 小鼠抗人 cd4 单抗1ml
c 小鼠抗人 cd8 单抗1ml
4.生物素标记羊抗小鼠 igg（ igg/bio）1.5ml × 2
5.碱性磷酸酶标记链霉卵白素(s-a/ap)1.5ml × 2
6.a 底物增强剂（40×)200μl
b 底物液（40×)200μl
c 底物缓冲液（10×)800μl
7.细胞核复染液5ml
8.封片剂1ml
9.记号笔1 支
10.pbs2 包(1000ml)
二：标本制备：
取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血 1～2ml，pbs 稀释 1-2 倍后，沿装有等量淋巴
细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000
转/分）15-20 分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加 5 倍 pbs，离心（1000
转/分）5 分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流
液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴 30μl 细胞悬液于载玻片上，
静置 2 分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或 37℃温箱 1 小时
烤干。或用 pbs 将单个核细胞调至 2×105个/ml，离心涂片机 1000 转离心 1-2
分钟制片，快速吹干或 37℃温箱 1 小时烤干。涂片前取防脱片剂 5-10μl 均匀
推片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以
防掉片。
三：显色剂的配制：
分别取 a 液 25ul，b 液 25ul 置于干净试管中混匀，室温放置 2-5 分钟，加 1ml
蒸馏水，混匀，再加 c 液 100ul 待用。
*使用前，根据所需显色剂用量，按照以上比例现配现用。
四：标本染色：
1. 充分干燥（室温 2 小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画
圈，然后滴加固定液 50μl，室温静置 2-3 分钟，用 pbs 淋洗，擦干玻片背面及
细胞外的 pbs。
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人 cd3、cd4、cd8 单抗适量(10-30μl）,4℃过夜，pbs 淋洗 3 次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠 igg 适量（10-30μl），37℃孵育 30-45 分钟，pbs
淋洗 3 次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育 30-45 分钟，pbs
淋洗 3 次。
5. 滴加显色剂 30-50μl，室温显色 20-40 分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜
上出现红色标记物时，用 pbs 淋洗。
6. 滴加细胞核复染液 30-50μl，30 秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。
五：观察：
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为阳性细胞。算出阳性率。
六：正常参考值：
正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：cd3，60-80%；cd4，35-55%；cd8，
20-30%；cd4/cd8 的比值在 1.5-2.0 范围内。
七：储存条件及有效期：
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1. 免疫细胞化学检测是一种包含多步骤的检测方法，试剂的选择、样本的处理、
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2. 任何阳性或阴性的解读，应由病理科医生结合病理形态学，临床表现及其它
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6. 试剂盒使用中，应有适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
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