尼康显微镜绿色荧光激发块
尼康绿色激发荧光滤光片产品组合中包含六种规格，这些组合包含带通或长通发射（屏障）滤光片，能够通过黄色，橙色，红色和近红外的窄带或宽带选择性地隔离荧光发射光谱区域。本互动教程探讨了激发和发射滤光片光谱分布以及双色镜的光谱变化如何影响信号水平，总体滤光片性能以及设计用于绿色区域中荧光团激发的组合的图像对比度。
本教程以“样本图像”窗口中出现的随机选择的荧光样本进行初始化，并在“滤光片组光谱图”图上显示带通发射（cy3；默认）绿色激发滤光片组合光谱图。组合的滤光器透射和反射光谱叠加在用于标记样品的绿色吸收荧光团的吸收和发射光谱上（自发荧光植物标本不包括荧光团光谱图）。荧光团吸收光谱在本教程中以棕色填充表示，而相应的发射光谱以灰色填充表示。滤波器组合的波长特性由过滤器设置滑块显示在本教程右下角的黄色框中。这些值会随着滑块从左到右的转换而不断更新。
为了操作本教程，请使用“滤镜组”滑块在可用于绿色激发的各种滤镜组合之间转换。当滑块从左向右平移时，激发滤光片和势垒滤光片以及双色镜的光谱轮廓被修改以模拟光谱轮廓的变化。注意，连续变化的光谱轮廓并不意味着任何滤波器组合都是可能的，并且各个滤波器组在光谱轮廓方面也不是可变的（无物理变化的滤波器）。所选滤光片组之间光谱分布的变化仅旨在帮助建立每个光学模块中使用的滤光片组合之间的关系。
通过选择或取消选择图表下方的适当复选框，可以从“滤波器组光谱图”图中添加或删除单个滤镜光谱（激发，发射和二色镜）。此外，可以使用一组类似的复选框（“光谱横截面”）添加或删除荧光团的吸收和发射光谱。样本图像与滤镜轮廓同时变化，以反映对比度变化和信号水平的变化，这些变化是由滑块平移产生的滤镜组合变化产生的。可以使用“选择标本”随时选择一个新标本下拉菜单，用于标记所选样本的荧光团直接列在菜单框下方。在许多情况下，样品会被两个或多个荧光探针染色，以证明通过带通和长通屏障（发射）滤光片组选择性隔离了荧光。
尼康绿色荧光滤光片组合的激发波长范围在510到560纳米之间，通带宽度分布为10、25、30和50纳米（包括窄，中和宽激发带）。三种组合使用相同的双色镜（565纳米），而其他三种具有更高的波长截止值（570或575纳米）的镜。六个尼康绿色激发滤光片组中的两个包含带宽为60和75纳米的带通势垒滤光片。
尼康绿色激发滤光片组中的两个包含带通发射（屏障）滤光片，旨在减少或消除来自用多个探针标记的样品中红色或近红外光谱区域发射的荧光团的干扰。的g-2e/c设置结合了窄的激发带（25个纳米），具有60纳米的发射带通。的cy3的组合（尼康的成员hyq滤波器组）包括类似的组件，但具有更宽的带通激发和发射滤波器（30个75纳米，分别地），并用二色镜切口上的570个纳米波长相比g-2e / c的 565纳米值组。两种利用带通发射滤光片的装置都适合与异硫氰酸四甲基罗丹明（tritc）和cy3一起使用，g-2e/c装置的带通范围为590-650纳米，cy3组合的带通范围为573-648纳米。使用cy3组生成的图像具有更黄色的视觉外观，反映了发射带通扩展到较低波长，并且由于较宽的带通值产生了更大的激发和发射能量，因此图像有些亮。
g-1a和g-1b滤波器组合具有非常类似的光学元件，并且可以被认为基本上是可互换的。它们的主要应用是汞弧光放电灯，用于选择546纳米绿色发射线。两者都配备有狭窄的10纳米通带激发滤光片（541-551纳米），以地减少自发荧光，但它们的双色镜和势垒（发射）滤光片的截止波长有所不同。g-1a组具有二色镜切口上的575个纳米，再加上580纳米（切口上）发射滤光器的波长。g-1b滤光片组采用较低波长的双色镜（565纳米）和较高波长的发射滤光片（590纳米）。与g-1a相比，g-1b组的反射镜和发射滤光片波长值之间增加的波长间隔可能会导致某些荧光染料产生明显的图像差异。此外，高发射滤光片截止点会排除黄色波长，并且g-1b滤光片组合会导致图像外观偏红。
考虑到标准的绿色激发滤光片组，g-2a组合包含了一个激发滤光片，该滤光片具有覆盖大部分绿色光谱区域的宽50纳米通带（510-560纳米）。长通屏障滤光片使大范围的荧光染料通过发射，这些荧光染料的发射波长超过590纳米截止点（橙色到近红外）。g-2a装置中使用的双色镜的截止波长为565纳米。一个类似的过滤器组中，g-2b组合使用相同的激励滤光器（50纳米的带通）为g-2a，但具有10纳米长的双色镜截止波长（575纳米），并配有一个长通屏障滤光片，该滤光片向红色光谱区偏移了20纳米，达到610纳米。使用g-2b设置产生的图像比g-2a产生的背景更暗，并且由于发射截止波长的增加而显得更红，从而排除了更多的橙黄色发射。
表1-尼康绿色激发滤光片组合规格激发块激发滤光片（nm）双色镜（nm）屏障滤光片（nm）备注
g-1a546/10（541-551） 575（lp） 580（lp） 窄激励带长通屏障滤波器
g-1b546/10（541-551） 565（lp） 590（lp） 窄激励带长通屏障滤波器
g-2a535/50（510-560） 565（lp） 590（lp） 标准g组长通屏障过滤器
g-2b535/50（510-560） 575（lp） 610（lp） 深色背景长通屏障过滤器
g-2e/c540/25（528-553） 565（lp） 620/60（590-650） 窄激励带通滤波器
cy3545/30（530-560） 570（lp） 610/75（573-648） 中等激励带通滤波器
g-1a-用于绿色波长激发的g-1a滤光片组合设计有狭窄的激发带通，以减少自发荧光并地减少样品辐射的暴露。长通屏障（发射）滤光片能够传输黄色，橙色和红色荧光团的信号，这些荧光团在中心绿色波长区域具有明显的吸收率。
g-1b - g-1b滤波器组合具有相似部件简档的g-1a组，纳入窄激发带通，以减少自体荧光和试件破坏，但具有不同的二色镜和发射滤光器切口上的波长。发射滤光片截止到较长波长的偏移会产生图像，由于增加了对黄色发射的阻挡，因此图像显得较红。
g-2a - g-2a滤光片组合配置为标准的绿色滤光片模块，具有宽的激发通带，适用于由绿色波长激活的大量荧光团。长通发射滤光片允许检测比黄色光谱区域更长的所有荧光波长。
g-2b - g-2b滤波器组合的设计具有与g-2a滤波器模块相同的激励特性。但是，在使用更高的双色镜和发射滤光片截止波长的情况下，g-2b套装可产生背景更暗，颜色向红色偏移的图像。
g-2e/c - g-2e/c滤光片组合设计用于良好性能，可与多种用于多种标记实验的流行荧光探针配合使用。窄激发带通提供选择性激发，而带通发射滤光片则减少了以红色和近红外发射的荧光团的干扰。
cy3（hyq） - cy3的绿色激发滤光器组合是在构造上相似g-2e/c组。但是，随着激发通带的扩大和发射带通的扩大以涵盖较低的波长，cy3滤光片块产生的图像稍微更亮一些，并反映出检测到的黄色光谱区发射更多。
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为了操作本教程，请使用“滤镜组”滑块在可用于绿色激发的各种滤镜组合之间转换。当滑块从左向右平移时，激发滤光片和势垒滤光片以及双色镜的光谱轮廓被修改以模拟光谱轮廓的变化。注意，连续变化的光谱轮廓并不意味着任何滤波器组合都是可能的，并且各个滤波器组在光谱轮廓方面也不是可变的（无物理变化的滤波器）。所选滤光片组之间光谱分布的变化仅旨在帮助建立每个光学模块中使用的滤光片组合之间的关系。
通过选择或取消选择图表下方的适当复选框，可以从“滤波器组光谱图”图中添加或删除单个滤镜光谱（激发，发射和二色镜）。此外，可以使用一组类似的复选框（“光谱横截面”）添加或删除荧光团的吸收和发射光谱。样本图像与滤镜轮廓同时变化，以反映对比度变化和信号水平的变化，这些变化是由滑块平移产生的滤镜组合变化产生的。可以使用“选择标本”随时选择一个新标本下拉菜单，用于标记所选样本的荧光团直接列在菜单框下方。在许多情况下，样品会被两个或多个荧光探针染色，以证明通过带通和长通屏障（发射）滤光片组选择性隔离了荧光。
尼康绿色荧光滤光片组合的激发波长范围在510到560纳米之间，通带宽度分布为10、25、30和50纳米（包括窄，中和宽激发带）。三种组合使用相同的双色镜（565纳米），而其他三种具有更高的波长截止值（570或575纳米）的镜。六个尼康绿色激发滤光片组中的两个包含带宽为60和75纳米的带通势垒滤光片。
尼康绿色激发滤光片组中的两个包含带通发射（屏障）滤光片，旨在减少或消除来自用多个探针标记的样品中红色或近红外光谱区域发射的荧光团的干扰。的g-2e/c设置结合了窄的激发带（25个纳米），具有60纳米的发射带通。的cy3的组合（尼康的成员hyq滤波器组）包括类似的组件，但具有更宽的带通激发和发射滤波器（30个75纳米，分别地），并用二色镜切口上的570个纳米波长相比g-2e / c的 565纳米值组。两种利用带通发射滤光片的装置都适合与异硫氰酸四甲基罗丹明（tritc）和cy3一起使用，g-2e/c装置的带通范围为590-650纳米，cy3组合的带通范围为573-648纳米。使用cy3组生成的图像具有更黄色的视觉外观，反映了发射带通扩展到较低波长，并且由于较宽的带通值产生了更大的激发和发射能量，因此图像有些亮。
g-1a和g-1b滤波器组合具有非常类似的光学元件，并且可以被认为基本上是可互换的。它们的主要应用是汞弧光放电灯，用于选择546纳米绿色发射线。两者都配备有狭窄的10纳米通带激发滤光片（541-551纳米），以地减少自发荧光，但它们的双色镜和势垒（发射）滤光片的截止波长有所不同。g-1a组具有二色镜切口上的575个纳米，再加上580纳米（切口上）发射滤光器的波长。g-1b滤光片组采用较低波长的双色镜（565纳米）和较高波长的发射滤光片（590纳米）。与g-1a相比，g-1b组的反射镜和发射滤光片波长值之间增加的波长间隔可能会导致某些荧光染料产生明显的图像差异。此外，高发射滤光片截止点会排除黄色波长，并且g-1b滤光片组合会导致图像外观偏红。
考虑到标准的绿色激发滤光片组，g-2a组合包含了一个激发滤光片，该滤光片具有覆盖大部分绿色光谱区域的宽50纳米通带（510-560纳米）。长通屏障滤光片使大范围的荧光染料通过发射，这些荧光染料的发射波长超过590纳米截止点（橙色到近红外）。g-2a装置中使用的双色镜的截止波长为565纳米。一个类似的过滤器组中，g-2b组合使用相同的激励滤光器（50纳米的带通）为g-2a，但具有10纳米长的双色镜截止波长（575纳米），并配有一个长通屏障滤光片，该滤光片向红色光谱区偏移了20纳米，达到610纳米。使用g-2b设置产生的图像比g-2a产生的背景更暗，并且由于发射截止波长的增加而显得更红，从而排除了更多的橙黄色发射。
表1-尼康绿色激发滤光片组合规格激发块激发滤光片（nm）双色镜（nm）屏障滤光片（nm）备注
g-1a546/10（541-551） 575（lp） 580（lp） 窄激励带长通屏障滤波器
g-1b546/10（541-551） 565（lp） 590（lp） 窄激励带长通屏障滤波器
g-2a535/50（510-560） 565（lp） 590（lp） 标准g组长通屏障过滤器
g-2b535/50（510-560） 575（lp） 610（lp） 深色背景长通屏障过滤器
g-2e/c540/25（528-553） 565（lp） 620/60（590-650） 窄激励带通滤波器
cy3545/30（530-560） 570（lp） 610/75（573-648） 中等激励带通滤波器
g-1a-用于绿色波长激发的g-1a滤光片组合设计有狭窄的激发带通，以减少自发荧光并地减少样品辐射的暴露。长通屏障（发射）滤光片能够传输黄色，橙色和红色荧光团的信号，这些荧光团在中心绿色波长区域具有明显的吸收率。
g-1b - g-1b滤波器组合具有相似部件简档的g-1a组，纳入窄激发带通，以减少自体荧光和试件破坏，但具有不同的二色镜和发射滤光器切口上的波长。发射滤光片截止到较长波长的偏移会产生图像，由于增加了对黄色发射的阻挡，因此图像显得较红。
g-2a - g-2a滤光片组合配置为标准的绿色滤光片模块，具有宽的激发通带，适用于由绿色波长激活的大量荧光团。长通发射滤光片允许检测比黄色光谱区域更长的所有荧光波长。
g-2b - g-2b滤波器组合的设计具有与g-2a滤波器模块相同的激励特性。但是，在使用更高的双色镜和发射滤光片截止波长的情况下，g-2b套装可产生背景更暗，颜色向红色偏移的图像。
g-2e/c - g-2e/c滤光片组合设计用于良好性能，可与多种用于多种标记实验的流行荧光探针配合使用。窄激发带通提供选择性激发，而带通发射滤光片则减少了以红色和近红外发射的荧光团的干扰。
cy3（hyq） - cy3的绿色激发滤光器组合是在构造上相似g-2e/c组。但是，随着激发通带的扩大和发射带通的扩大以涵盖较低的波长，cy3滤光片块产生的图像稍微更亮一些，并反映出检测到的黄色光谱区发射更多。
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