植物基因组提取试剂盒使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以10e2-10e7 拷贝/μl 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μl 荧光 pcr 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μl 阳性对照(浓度为 1×10e8 拷贝/μl,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10e7 拷贝/μl 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μl 1×10e7 拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10e6 拷贝/μl 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μl 1×10e6 拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10e5 拷贝/μl 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品dna 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 dna,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 n 个样品,则需要进行 n+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qpcr 反应(20μl 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 n+9 个 pcr 管,其中 n+2 个用于上步得到的 n+2 个样品,1 个用于 pcr 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 n+4 个 pcr 管,其中 n+2 个用于上步得到的 n+2 个样品,1 个用于 pcr 阴性对照(用水做模板),1 个用于pcr 阳性对照。
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