SH-SY5Y细胞转染步骤
sh-sy5y细胞是神经母细胞瘤细胞系中常用的模型系统，广泛用于神经生物学和神经药理学研究。转染sh-sy5y细胞是一项重要的实验技术，在基因功能研究、蛋白表达和定量分析等方面扮演着关键角色。然而，由于sh-sy5y细胞的特殊性质，使用传统转染方法可能会遇到一些困难。因此，本文将介绍一种优化的sh-sy5y细胞转染方法，并详细描述每个步骤。
材料与试剂:
- sh-sy5y细胞系：可从cell bank of the chinese academy of sciences或其他来源获得。
-细胞培养基：dulbecco's modified eagle medium（dmem）/f12混合培养基。
-热稳定型胰酶：用于细胞的传代与分离。
-转染试剂：例如，聚乙烯亚胺（pei）、脂质体等。
-目标基因的质粒dna或sirna：用于转染和表达。
- opti-mem：用于稀释转染试剂和质粒。
优化方法:
一、准备sh-sy5y细胞
1.获得sh-sy5y细胞系并进行培养。
2.在t25细胞培养瓶中分别加入10 ml完整的dmem/f12培养基及10%胎牛血清（fbs）。
3.将sh-sy5y细胞从细胞冻存管中复苏，并将细胞传递至培养瓶中。
4.在37℃、5% co2的培养箱中培养细胞，直至细胞达到80-90%的密度。
二、转染前的预处理
1.转染前用dmem/f12培养基含10% fbs对sh-sy5y细胞进行预处理。
2.将细胞培养至80-90%的密度。
3.用1x pbs洗涤细胞2次，去除细胞内的残留培养基。
三、转染操作
1.根据转染试剂的使用说明，将转染试剂稀释至合适的浓度，如使用pei转染，可在opti-mem中稀释pei至最终浓度。
2.在另一个离心管中将质粒dna或sirna按照使用的量稀释至合适体积，并在opti-mem中混合均匀。
四、转染操作步骤
1.向细胞中加入预先稀释好的转染试剂，注意不要形成气泡并避免细胞过度干扰。
2.轻轻震荡培养瓶，使转染试剂均匀分布。
3.将稀释好的质粒dna或sirna加入到培养基中，与转染试剂充分混合，避免形成沉淀。
4.震荡培养瓶并置于37℃的培养箱中进行培养。
5.根据研究需求，在48-72小时后进行下一步实验（如蛋白表达、基因敲除等）。
本文详细介绍了一种优化的sh-sy5y细胞转染方法。通过合适的细胞预处理步骤，并使用适当的转染试剂和质粒dna/sirna浓度，可以实现高效且可重复的sh-sy5y细胞转染。值得指出的是，转染条件可能因具体实验目的而略有不同，因此每位研究者都应根据实验需求进行适当的优化。这种优化后的转染方法将有助于更好地理解sh-sy5y细胞中的基因功能并推动神经科学研究的发展。
苏州阿尔法实验器材有限公司致力于生物实验室仪器设备，实验耗材，实验试剂的供应服务14年以上，累计服务1000多个客户。
我们主要经营的实验室仪器类产品包括多种类型的实验室培养箱，如co2培养箱、co2摇床、全温振荡培养箱、恒温恒湿培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、bod培养箱、低温培养箱等。此外，我们还提供移液器、生物反应器、发酵罐、液氮罐、超纯水机、天平、高速离心机、台式离心机、迷你离心机、研磨机、组织研磨仪、低温高速离心机洁净工作台等实验室设备。
多能干细胞，成骨诱导分化培养基,骨髓干细胞、胚胎干细胞、胎牛血清、肿瘤细胞等细胞株、细胞系、sh-sy5y细胞细胞培养试剂、细胞培养耗材、实验室消毒剂等上千款产品，品类丰富齐全，可根据您的需求，提供样机体验性能服务。我们与80余家厂商企业合作，其中包括知楚仪器、朗基、中科美菱、梅特勒、乐枫、搏旅、nest、天根、奥盛等。
若您需要进一步了解细胞实验室仪器设备相关信息，进入 苏州阿尔法生物实验器材网站进行咨询。
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-目标基因的质粒dna或sirna：用于转染和表达。
- opti-mem：用于稀释转染试剂和质粒。
优化方法:
一、准备sh-sy5y细胞
1.获得sh-sy5y细胞系并进行培养。
2.在t25细胞培养瓶中分别加入10 ml完整的dmem/f12培养基及10%胎牛血清（fbs）。
3.将sh-sy5y细胞从细胞冻存管中复苏，并将细胞传递至培养瓶中。
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二、转染前的预处理
1.转染前用dmem/f12培养基含10% fbs对sh-sy5y细胞进行预处理。
2.将细胞培养至80-90%的密度。
3.用1x pbs洗涤细胞2次，去除细胞内的残留培养基。
三、转染操作
1.根据转染试剂的使用说明，将转染试剂稀释至合适的浓度，如使用pei转染，可在opti-mem中稀释pei至最终浓度。
2.在另一个离心管中将质粒dna或sirna按照使用的量稀释至合适体积，并在opti-mem中混合均匀。
四、转染操作步骤
1.向细胞中加入预先稀释好的转染试剂，注意不要形成气泡并避免细胞过度干扰。
2.轻轻震荡培养瓶，使转染试剂均匀分布。
3.将稀释好的质粒dna或sirna加入到培养基中，与转染试剂充分混合，避免形成沉淀。
4.震荡培养瓶并置于37℃的培养箱中进行培养。
5.根据研究需求，在48-72小时后进行下一步实验（如蛋白表达、基因敲除等）。
本文详细介绍了一种优化的sh-sy5y细胞转染方法。通过合适的细胞预处理步骤，并使用适当的转染试剂和质粒dna/sirna浓度，可以实现高效且可重复的sh-sy5y细胞转染。值得指出的是，转染条件可能因具体实验目的而略有不同，因此每位研究者都应根据实验需求进行适当的优化。这种优化后的转染方法将有助于更好地理解sh-sy5y细胞中的基因功能并推动神经科学研究的发展。
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