QPCR法支原体快检法
支原体(mycoplasma)：目前发现的最小的原核生物，据统计约 15~35% 的细胞被支原体污染。支原体污染会改变宿主细胞的结构与功能，易致实验结果不稳定，须对培养细胞定期进行支原体检测。本产品试剂盒采用双色荧光 qpcr (taqman 探针法)检测支原体dna，检测对象为细胞培养的上清液或细胞本身。该试剂盒具有以下特点：
灵敏：配合高效 dna 提取试剂盒，检测灵敏度达 10cfu/ml。
稳定：全程闭管操作，无交叉污染。
可靠：含内参基因，避免假阴性。
方便：操作简单，无需电泳步骤。
定量：以 ct 值判断，可定量检测。
【操作步骤】
1. 样本制备（自备）
a 样本的标准制备方案：请使用高效dna 提取试剂盒提取样本 dna。推荐使用无微生物污染级别的核酸提取试剂盒。低温保存的血清、脐带血、胰酶、抗生素、未使用的培养液等生物制品，即使存在支原体污染，一般支原体含量也较少，建议提取样本dna 后检测。
b 样本的简易快速制备方案：可用于细胞培养上清、细胞悬液、血液，样本制备步骤如下。
（1） 细胞培养上清：取 1~1.5ml 细胞培养上清；1000 rpm 离心 3 分钟；取 2µl 上清作为模板进行qpcr反应。
（2） 细胞悬液：直接取 2µl 细胞悬液作为模板进行qpcr 反应。要求样本内细胞总数量不超过 10000 个，样本可用细胞培养基稀释。
（3） 血液：直接取血液样本作为模板进行 qpcr 反应。注意血液中的细胞对pcr反应有较强抑制作用，内参检测通道会显示异常。根据不同应用场景，有两个建议：①中间质控环节，对灵敏度要求中等，无需达到10cfu/ml，可用无菌水稀释 10 倍，充分混匀后，取 2µl作为模板进行 qpcr 反应。②放行检测，要求灵敏度达到10cfu/ml，建议提取样本dna 后检测。
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b 样本的简易快速制备方案：可用于细胞培养上清、细胞悬液、血液，样本制备步骤如下。
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（3） 血液：直接取血液样本作为模板进行 qpcr 反应。注意血液中的细胞对pcr反应有较强抑制作用，内参检测通道会显示异常。根据不同应用场景，有两个建议：①中间质控环节，对灵敏度要求中等，无需达到10cfu/ml，可用无菌水稀释 10 倍，充分混匀后，取 2µl作为模板进行 qpcr 反应。②放行检测，要求灵敏度达到10cfu/ml，建议提取样本dna 后检测。
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