荧光-PCR法的相关数据处理常识要弄清
实时荧光-pcr法是在dna扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（pcr）循环后产物总量的技术。它通过内参或者外参法对待测样品中的特定dna序列进行定量分析。实时荧光定量pcr是在pcr定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。对荧光-pcr法的数据处理我们要了解一个关键的因素“ct值”。在实时定量pcr的数据图中，x-轴表示pcr循环数，y-轴表示扩增反应的荧光值，也就是扩增产物的量。这个图中有基线、阈值、ct值这几个概念，从这几个值我们能够最终得到模板中目的基因的含量。
基线是扩增曲线中的水平部分。在反应初阶段，虽然产物是指数级增长，但是由于总量太少，其荧光处于背景水平，检测不到荧光增加。因此基线信号的产生是由于测量的偶然误差引起的。然而当累积了足够的扩增产物，足以产生可检测的荧光信号时，这个信号的值就被称为阈值，通常阈值默认为基线信号的标准偏差×10。在阈值的前后，pcr的反应仍然是指数级增长的，因此此时的pcr结果可靠，可以准确地反映体系中模板的初始量。ct值是信号强度达到阈值时所需要的循环数，也就是扩增曲线与阈值的交叉点。
为什么知道了ct值就能够得到初的目的基因含量呢？
一个基因的单次反应扩增曲线中要计算扩增产物的分子数n，它等于模板的分子数乘以1+扩增效率的n次方，n代表循环次数。也就是说，如果扩增效率为100%，产物分子数就等于模板数乘以2的n次方。但是显然，在线性增长期和平台期，扩增效率不可能是100%，因此上述pcr理论方程只在指数期成立。
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