尼罗红的使用说明！
尼罗红的使用说明！
尼罗红是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料，对光敏感，与脂类物质结合并发出荧光，在激发波长530nm激发下，显示强烈桔红色荧光。同时在紫外光的照射下显示红色。另外，也可用于蛋白质染色。
产品名称：尼罗红
英文名称：9-(diethylamino)benzo[a]phenoxazin-5(5h)-one
分子式：c20h18n2o2
分子量：318.37
产品规格：100mg
纯度：≥95%
外观：墨绿色粉末
溶解性：1mg/ml in etoh
荧光光谱ex/em：530nm/635nm
保存条件：rt，避光，有效期3年
产品说明：
一、工作液制备
1）母液准备：取适量的尼罗红用无水 dmso 充分溶解制备 1mm 储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。
2）工作液准备：用 hhbs 或生理缓冲液，ph 7将母液按 1:1000 稀释为1×尼罗红工作液，漩涡混匀。
【注】：尼罗红的实际染色浓度请参考文献或实验室体系来调整。
二、染色步骤
1）用检测化合物处理细胞一段时间；
2）离心并调整细胞浓度为 1-5×105cell/管；
3）用 500µl 尼罗红工作液重悬细胞；
4）室温或 37ºc避光孵育 5-10min；
5）吸掉染色工作液，用 hhbs 或适当缓冲液清洗细胞；
6）用500µl 预热的 hhbs 或培养基重悬细胞，使细胞密度为 1-5×105cell/管；
7）荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，ex/em = 552/636 nm；
【注】
●对于贴壁细胞，可用 hhbs 或适当缓冲液清洗细胞，然后直接加入尼罗红工作液孵育。
●细胞也可预固定，然后用尼罗红工作液染色。
注意事项:
1）本品仅供科研实验用，不做其它用途。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
关键词：荧光显微镜 流式细胞仪
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1）母液准备：取适量的尼罗红用无水 dmso 充分溶解制备 1mm 储存液，按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，避光保存。
2）工作液准备：用 hhbs 或生理缓冲液，ph 7将母液按 1:1000 稀释为1×尼罗红工作液，漩涡混匀。
【注】：尼罗红的实际染色浓度请参考文献或实验室体系来调整。
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2）离心并调整细胞浓度为 1-5×105cell/管；
3）用 500µl 尼罗红工作液重悬细胞；
4）室温或 37ºc避光孵育 5-10min；
5）吸掉染色工作液，用 hhbs 或适当缓冲液清洗细胞；
6）用500µl 预热的 hhbs 或培养基重悬细胞，使细胞密度为 1-5×105cell/管；
7）荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，ex/em = 552/636 nm；
【注】
●对于贴壁细胞，可用 hhbs 或适当缓冲液清洗细胞，然后直接加入尼罗红工作液孵育。
●细胞也可预固定，然后用尼罗红工作液染色。
注意事项:
1）本品仅供科研实验用，不做其它用途。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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