奶粉中的*、D3、E的测定（固相萃取-液相色谱法）
目前对奶粉中脂溶性*、d3、e测定的前处理方法多采用皂化方法去除脂肪[1-7]，皂化过程后使用大量的有机溶剂进行液液萃取以洗除杂质，操作步骤复杂，*3样品还需经硅胶柱做进一步的净化才能进行检测，造成实验时间成本的增加，不利于大批量样品的检测。本文研究了利用固相萃取法作为奶粉样品的前处理方法，液相色谱法作为检测手段，实现同时测定奶粉中*、d3、e的含量，该方法可简化奶粉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
1. 样品处理
皂化提取：2g奶粉加入1ml水混匀，加入1 ml vc/乙醇溶液破壁处理，混匀，加入10ml氢氧化钾碱液（1.25g/ml），55℃条件下，水浴皂化45min，取出冷却至室温，向皂化液中加入适量无水乙醇，使之含50%乙醇，6000r/min离心5min后，取上清液，用1至2个微孔过滤器对其进行过滤，至qdaura 卓睿™全自动固相萃取仪上样管中作为待净化液。
2. 固相萃取净化
qdauratm卓睿全自动固相萃取仪程序设定：5ml甲醇，和5ml水活化，加样，10ml50%乙醇/水淋洗，抽干20min。2ml 丙酮，10ml乙酸乙酯洗脱，收集。收集液于40℃氮气吹干，1ml甲醇定容，0.45um ptfe过滤器过滤，准备进液相色谱分析。
3. 色谱条件
液相色谱仪：lc-10f
色谱柱：venusil mp c18，4.6 mm *150 mm，5µm；
流动相：甲醇；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：20µl；
波长变化见表1：
表1 波长变化梯度表
组分
时间/min
波长/nm
*
0
325
*3
5
264
*
9
294
4. 结果与讨论
图1 低浓度维生素标准溶液的色谱图
从左至右依次为：*（5.0µg/ml）、*3（9.8µg/ml）、*（99µg/ml）
4.1 工作曲线及检出限
根据仪器对各个物质的响应情况，将*、d3、e分别由储备液用正己烷逐级稀释，各稀释成7个浓度，*浓度范围为0.25µg/ml~25µg/ml，*3浓度范围为0.30µg/ml~30µg/ml，*浓度范围为2.5µg/ml~250µg/ml，将溶液进hplc进行检测，计算出检出限，回归方程及检出限见表2。可见，液相色谱仪对*、d3、e的响应与浓度呈良好的线性关系。
表2 线性回归方程及检出限
化合物
回归方程
相关系数
检出限
lod*
（µg/ml）
*
y=55.572*x-1.517
1
0.02
*3
y=57.608*x-1.9814
1
0.05
*
y=8.1342*x-1.9094
1
0.39
图2 皂化-固相萃取法色谱图
4.2 皂化-固相萃取和传统皂化-液液萃取法的实验效果对比
传统皂化-液液萃取法参考《gb 5413.9—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中*、d、e 的测定》的样品前处理2个奶粉（每个样称取2g）的平行样，作为参照。同时以皂化固相萃取法做两个平行样品。
表3 传统皂化-液液萃取法与皂化固相萃取法的实验结果对比
*峰面积
*峰面积
*峰面积
传统皂化-液液萃取法
778
0
148
皂化固相萃取法
1500
0
716
由于选用的奶粉vd含量较低，没有检出。
从上述对比可以看出，皂化固相萃取法相比国标的皂化液液萃取法具有简单的优势，同时萃取效果更好。*的缺点是出峰靠前的*附近有较多的弱保留物质的干扰，但是依靠mp c18的强大的分离能力，可以实现分离*和干扰物质的基线分离。同时这些弱保留的物质很容易被洗脱出色谱柱，所以不会对色谱柱造成较大的污染。
4.2.3加标回收率实验
表4 加标回收率及精密度
化合物
样1（%）
样2（%）
样3（%）
样4（%）
样5（%）
平均回收率%
rsd（%，n=5）
低浓度
加标
*
89.91
91.48
86.12
89.59
90.12
89.44
2.33
维生d3
112.36
114.63
106.34
111.63
105.35
110.06
3.83
*
85.58
86.87
81.83
85.64
84.56
84.90
2.86
高浓度
加标
*
88.84
91.48
89.61
86.43
89.57
89.18
2.04
维生d3
93.06
94.65
93.19
90.38
92.86
92.83
1.66
*
86.68
87.62
87.00
83.25
85.94
86.10
1.98
4.2.3 实际样品检测
根据所建立的方法分析了从市场上购买的3种品牌奶粉，分别编号为1号、2号和3号按照上述方法进行样品处理和检测，所得*、d3和e的含量结果见表6。
图7. 2号奶粉样品色谱图
表6 奶粉中维生素含量（µg/g）
化合物
1号
（µg/g）
2号
（µg/g）
3号
（µg/g）
*
6.008
42.5
165.0
*3
0.392
0.000
0.463
*
5.712
6.231
9.344
4.3 结论
采用改进后的皂化-固相萃取方法来替代传统的皂化法来测定奶粉中维生素含量，皂化能充分提取出奶粉中*，d，e，再经过cleanert vitamin固相萃取柱进行净化吸附洗脱，既避免了传统皂化中液液萃取中有机溶剂的大量使用，也简化了操作步骤，同时能满足一般奶粉样品的含量分析要求。
5.订货信息
产品名称
规格包装
订货号
lc-10f液相色谱仪
10ml/min，梯度系统，200-800nm双波长检测器
fl-lc010gs
lc-10f液相色谱仪
配紫外可变波长检测器
lc-10f
cc-100分析型色谱柱温箱
温控范围：5-70℃；
可安装1-2支300mm色谱柱
cc-100
qdaura 卓睿™全自动固相萃取仪
4通道24位
spe-40
cleanert vitamin*萃取柱
1g/12ml , 20支/pk
v00012
venusil mp c18液相色谱柱
4.6 mm x150 mm，5µm
v952505-0
微孔过滤膜（ptfe疏水）-双膜
045µm,直径13mm,100/pk
as041345-p
微孔过滤膜（pvdf亲水）-双膜
0.45µm,直径13mm,100/pk
as073345-g
一次性*
5ml, 100/pk
zsq-5ml
1.5ml样品瓶
100/pk
1109-0519
1.5ml样品瓶盖
100/pk
0915-1819
甲醇
4×4l/瓶
ah230-4
乙醇
4×4l/箱
ah090-4
乙酸乙酯
4×4l/箱
ah100-4
正己烷
4×4l/箱
ah216-4
施工工地扬尘在线监测管理办法
快速识别丝锥优劣的检验方法
数控立式珩磨机特色
筑路和建筑业中使用zui广的设备—颚式破碎机
排气罩的工作原理
奶粉中的*、D3、E的测定（固相萃取-液相色谱法）
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1. 样品处理
皂化提取：2g奶粉加入1ml水混匀，加入1 ml vc/乙醇溶液破壁处理，混匀，加入10ml氢氧化钾碱液（1.25g/ml），55℃条件下，水浴皂化45min，取出冷却至室温，向皂化液中加入适量无水乙醇，使之含50%乙醇，6000r/min离心5min后，取上清液，用1至2个微孔过滤器对其进行过滤，至qdaura 卓睿™全自动固相萃取仪上样管中作为待净化液。
2. 固相萃取净化
qdauratm卓睿全自动固相萃取仪程序设定：5ml甲醇，和5ml水活化，加样，10ml50%乙醇/水淋洗，抽干20min。2ml 丙酮，10ml乙酸乙酯洗脱，收集。收集液于40℃氮气吹干，1ml甲醇定容，0.45um ptfe过滤器过滤，准备进液相色谱分析。
3. 色谱条件
液相色谱仪：lc-10f
色谱柱：venusil mp c18，4.6 mm *150 mm，5µm；
流动相：甲醇；
流速：1ml/min；
柱温：30℃；
进样量：20µl；
波长变化见表1：
表1 波长变化梯度表
组分
时间/min
波长/nm
*
0
325
*3
5
264
*
9
294
4. 结果与讨论
图1 低浓度维生素标准溶液的色谱图
从左至右依次为：*（5.0µg/ml）、*3（9.8µg/ml）、*（99µg/ml）
4.1 工作曲线及检出限
根据仪器对各个物质的响应情况，将*、d3、e分别由储备液用正己烷逐级稀释，各稀释成7个浓度，*浓度范围为0.25µg/ml~25µg/ml，*3浓度范围为0.30µg/ml~30µg/ml，*浓度范围为2.5µg/ml~250µg/ml，将溶液进hplc进行检测，计算出检出限，回归方程及检出限见表2。可见，液相色谱仪对*、d3、e的响应与浓度呈良好的线性关系。
表2 线性回归方程及检出限
化合物
回归方程
相关系数
检出限
lod*
（µg/ml）
*
y=55.572*x-1.517
1
0.02
*3
y=57.608*x-1.9814
1
0.05
*
y=8.1342*x-1.9094
1
0.39
图2 皂化-固相萃取法色谱图
4.2 皂化-固相萃取和传统皂化-液液萃取法的实验效果对比
传统皂化-液液萃取法参考《gb 5413.9—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中*、d、e 的测定》的样品前处理2个奶粉（每个样称取2g）的平行样，作为参照。同时以皂化固相萃取法做两个平行样品。
表3 传统皂化-液液萃取法与皂化固相萃取法的实验结果对比
*峰面积
*峰面积
*峰面积
传统皂化-液液萃取法
778
0
148
皂化固相萃取法
1500
0
716
由于选用的奶粉vd含量较低，没有检出。
从上述对比可以看出，皂化固相萃取法相比国标的皂化液液萃取法具有简单的优势，同时萃取效果更好。*的缺点是出峰靠前的*附近有较多的弱保留物质的干扰，但是依靠mp c18的强大的分离能力，可以实现分离*和干扰物质的基线分离。同时这些弱保留的物质很容易被洗脱出色谱柱，所以不会对色谱柱造成较大的污染。
4.2.3加标回收率实验
表4 加标回收率及精密度
化合物
样1（%）
样2（%）
样3（%）
样4（%）
样5（%）
平均回收率%
rsd（%，n=5）
低浓度
加标
*
89.91
91.48
86.12
89.59
90.12
89.44
2.33
维生d3
112.36
114.63
106.34
111.63
105.35
110.06
3.83
*
85.58
86.87
81.83
85.64
84.56
84.90
2.86
高浓度
加标
*
88.84
91.48
89.61
86.43
89.57
89.18
2.04
维生d3
93.06
94.65
93.19
90.38
92.86
92.83
1.66
*
86.68
87.62
87.00
83.25
85.94
86.10
1.98
4.2.3 实际样品检测
根据所建立的方法分析了从市场上购买的3种品牌奶粉，分别编号为1号、2号和3号按照上述方法进行样品处理和检测，所得*、d3和e的含量结果见表6。
图7. 2号奶粉样品色谱图
表6 奶粉中维生素含量（µg/g）
化合物
1号
（µg/g）
2号
（µg/g）
3号
（µg/g）
*
6.008
42.5
165.0
*3
0.392
0.000
0.463
*
5.712
6.231
9.344
4.3 结论
采用改进后的皂化-固相萃取方法来替代传统的皂化法来测定奶粉中维生素含量，皂化能充分提取出奶粉中*，d，e，再经过cleanert vitamin固相萃取柱进行净化吸附洗脱，既避免了传统皂化中液液萃取中有机溶剂的大量使用，也简化了操作步骤，同时能满足一般奶粉样品的含量分析要求。
5.订货信息
产品名称
规格包装
订货号
lc-10f液相色谱仪
10ml/min，梯度系统，200-800nm双波长检测器
fl-lc010gs
lc-10f液相色谱仪
配紫外可变波长检测器
lc-10f
cc-100分析型色谱柱温箱
温控范围：5-70℃；
可安装1-2支300mm色谱柱
cc-100
qdaura 卓睿™全自动固相萃取仪
4通道24位
spe-40
cleanert vitamin*萃取柱
1g/12ml , 20支/pk
v00012
venusil mp c18液相色谱柱
4.6 mm x150 mm，5µm
v952505-0
微孔过滤膜（ptfe疏水）-双膜
045µm,直径13mm,100/pk
as041345-p
微孔过滤膜（pvdf亲水）-双膜
0.45µm,直径13mm,100/pk
as073345-g
一次性*
5ml, 100/pk
zsq-5ml
1.5ml样品瓶
100/pk
1109-0519
1.5ml样品瓶盖
100/pk
0915-1819
甲醇
4×4l/瓶
ah230-4
乙醇
4×4l/箱
ah090-4
乙酸乙酯
4×4l/箱
ah100-4
正己烷
4×4l/箱
ah216-4
施工工地扬尘在线监测管理办法
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数控立式珩磨机特色
筑路和建筑业中使用zui广的设备—颚式破碎机
排气罩的工作原理
奶粉中的*、D3、E的测定（固相萃取-液相色谱法）
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宁德保温板包装机-保温板热收缩机销售
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阀座密封面或衬里材料代号及压力代号和阀体材料代号的行业标准
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偏光应力仪究竟运用什么原理检测玻璃瓶内应力
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