桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较
桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较桶装水中铜绿假单胞菌检测方法的比较作者：张淑红，吴清平，徐晓可，张菊梅，潘宝怡、彭飞艇
（广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,广东省微生物研究所，广东广州 510070）
摘要：分别采用传统国标gb/t 8538-2008 方法、基于oprl 基因的pcr 方法和环介导等温扩增(lamp)方法检测桶装水中的铜绿假单胞菌，比较三种方法的检测效果。结果显示，采集的46 份市场水样中，用传统gb8538-2008 方法检出了3 份阳性样品，检出率为6.5%，检测时间至少2 天；而pcr 和lamp 方法都检出4 份阳性样品，检出率为8.7%，并且可在24 h 内报告结果。pcr 和lamp 方法与传统方法相比具有快速灵敏等优点，可用于大批量水样的快速检测和结果初筛。
铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[1~3]。近年来，随着范围内桶装饮用水消费量的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注
[4~10]。目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，pcr 和环介导等温扩增技术（lamp）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快速检测中。本文通过对市场销售的桶装水进行抽样检测，比较了传统培养法与pcr 和lamp 方法的特点，为桶装饮用水的快速检测提供参考。
(全文 略)
本文抽查了广州市场上46 份各品牌桶装成品水，平行采用传统国标、pcr 方法和lamp 方法对铜绿假单胞菌进行检测。结果发现，传统国标方法gb8538-2008 检出3 份阳性样品（8#、19#和22#），而pcr 和lamp 方法结果一致，都可以检出4 份阳性样品（2#、8#、19#
和22#）。三种检测方法对8#、19#和22#样品的检测结果吻合，2#样品采用传统的膜过滤和平板培养方法未检出，但是经过pcr 产物测序证明样品中存在铜绿假单胞菌。造成这种差异结果的原因主要有两方面，一方面，分析可能是铜绿假单胞菌处于逆境下的不可培养态。另一方面，在桶装水中大量死菌存在时pcr可以检测出（pcr 灵敏度约为103 cfu/ml），而传统方法分离不到，pcr 检测结果假阳性。事实上，按照国家标准要求，我国饮用水处理工厂的水源水和水处理工艺相对严格，铜绿假单胞菌不可能达到很高的数量，成品水中存在大量死菌的情况比较少，因此，pcr 检测结果是假阳性的可能性较小，基本是由于活菌数量增长检测出的结果。很多情况下，铜绿假单胞菌经过水源水消毒，管道消毒和臭氧消毒后，其活力会大大降低，处于非可培养状态，导致传统方法培养不出和检测结果的假阴性，另外，在受到水中其他杂菌的抑制时也可能导致检测结果的假阴性[16~17]。鉴于此，本文在利用pcr 和lamp 方法时进行了一定时间增菌（前期试验发现18 h 是两种检测方法的增菌时间），以尽量避免或减少检测结果假阴性。综合比较三种检测方法可以看出，传统方法的检测周期较长，至少2 天报告结果，检测灵敏度低，而pcr 和lamp 方法都可以在24 h 内完成样品检测，具有简便、快速、灵敏等特点。pcr 方法整个过程约需要22 h（包括过滤1 min、增菌18 h、过滤1 min、dna 提取15 min、pcr 扩增3 h、电泳0.5 h）；lamp方法整个检测时间约为19 h（包括过滤1 min、增菌18 h、dna 提取15 min、lamp 扩增45 min）。与其他方法相比，lamp 方法操作更简单，不需昂贵仪器，仅水浴锅就可以完成，且结果可用肉眼直接观察，已被成功应用于各种食源性致病菌的快速检测[18~19]。同样，在水样检测方面，为提高检测效率，可以将pcr和lamp 应用于出厂水样铜绿假单胞菌的快速初筛。
其他致病菌lamp法检测试剂盒：/chanpin/wswhc/kj/196.html
国标法铜绿假单胞菌检测仪器试剂：/anquan/194.html
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摘要：分别采用传统国标gb/t 8538-2008 方法、基于oprl 基因的pcr 方法和环介导等温扩增(lamp)方法检测桶装水中的铜绿假单胞菌，比较三种方法的检测效果。结果显示，采集的46 份市场水样中，用传统gb8538-2008 方法检出了3 份阳性样品，检出率为6.5%，检测时间至少2 天；而pcr 和lamp 方法都检出4 份阳性样品，检出率为8.7%，并且可在24 h 内报告结果。pcr 和lamp 方法与传统方法相比具有快速灵敏等优点，可用于大批量水样的快速检测和结果初筛。
铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa）是一种重要的水源性致病菌，广泛存在于各类型水中，对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素具有很强的抵抗力，可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病[1~3]。近年来，随着范围内桶装饮用水消费量的不断上升，国内外有关铜绿假单胞菌污染桶装水的报道逐渐增多，引起了诸多学者和消费者的普遍关注
[4~10]。目前桶装饮用水铜绿假单胞菌检测技术方面，除传统的生化培养外，pcr 和环介导等温扩增技术（lamp）等分子方法逐步建立起来，应用于水样快速检测中。本文通过对市场销售的桶装水进行抽样检测，比较了传统培养法与pcr 和lamp 方法的特点，为桶装饮用水的快速检测提供参考。
(全文 略)
本文抽查了广州市场上46 份各品牌桶装成品水，平行采用传统国标、pcr 方法和lamp 方法对铜绿假单胞菌进行检测。结果发现，传统国标方法gb8538-2008 检出3 份阳性样品（8#、19#和22#），而pcr 和lamp 方法结果一致，都可以检出4 份阳性样品（2#、8#、19#
和22#）。三种检测方法对8#、19#和22#样品的检测结果吻合，2#样品采用传统的膜过滤和平板培养方法未检出，但是经过pcr 产物测序证明样品中存在铜绿假单胞菌。造成这种差异结果的原因主要有两方面，一方面，分析可能是铜绿假单胞菌处于逆境下的不可培养态。另一方面，在桶装水中大量死菌存在时pcr可以检测出（pcr 灵敏度约为103 cfu/ml），而传统方法分离不到，pcr 检测结果假阳性。事实上，按照国家标准要求，我国饮用水处理工厂的水源水和水处理工艺相对严格，铜绿假单胞菌不可能达到很高的数量，成品水中存在大量死菌的情况比较少，因此，pcr 检测结果是假阳性的可能性较小，基本是由于活菌数量增长检测出的结果。很多情况下，铜绿假单胞菌经过水源水消毒，管道消毒和臭氧消毒后，其活力会大大降低，处于非可培养状态，导致传统方法培养不出和检测结果的假阴性，另外，在受到水中其他杂菌的抑制时也可能导致检测结果的假阴性[16~17]。鉴于此，本文在利用pcr 和lamp 方法时进行了一定时间增菌（前期试验发现18 h 是两种检测方法的增菌时间），以尽量避免或减少检测结果假阴性。综合比较三种检测方法可以看出，传统方法的检测周期较长，至少2 天报告结果，检测灵敏度低，而pcr 和lamp 方法都可以在24 h 内完成样品检测，具有简便、快速、灵敏等特点。pcr 方法整个过程约需要22 h（包括过滤1 min、增菌18 h、过滤1 min、dna 提取15 min、pcr 扩增3 h、电泳0.5 h）；lamp方法整个检测时间约为19 h（包括过滤1 min、增菌18 h、dna 提取15 min、lamp 扩增45 min）。与其他方法相比，lamp 方法操作更简单，不需昂贵仪器，仅水浴锅就可以完成，且结果可用肉眼直接观察，已被成功应用于各种食源性致病菌的快速检测[18~19]。同样，在水样检测方面，为提高检测效率，可以将pcr和lamp 应用于出厂水样铜绿假单胞菌的快速初筛。
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国标法铜绿假单胞菌检测仪器试剂：/anquan/194.html
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