定量PCR的主要方法
荧光定量pcr（real-time pcr），是指在pcr扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。定量pcr方法：
1、竞争法选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化pcr产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。2、内参照法在不同的pcr反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在pcr产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。3、pcr－elisa法利用di高辛或生物su等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物su酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的pcr－elisa法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
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