方法精密度
将低、中、高三个浓度srm 968f血清标准品溶液 加入 4% bsa混合血清样本经本法处理后进行检测, 每个浓度重复6次,连续检测三天,计算日内精密度 为 0.9% ~ 9.6% ,日间精密度为 3.0% ~ 9.3% (见表 3)。 该方法同时测定6种脂溶性.维生素的日内精密 度和日间精密度均在 15% 以内,方法精密度满足检 测需求。
方法准确度
将低、中、高浓度的srm 968f血清标准品溶液加入混合血清样本中按本法进行前处理后进行检测,每 个浓度重复6次,计算加标回收率,3个水平的加标 回收率为86.6% ~ 107.7% ,相对标准偏差(rsd)为1.46% ~ 9.39% (见表 4)。 该方法加标回收率均在80% ~ 120% 以内,方法准确度高满足检测需求。
方法验证
采用建立的uplc-ms / ms方法对 美国国家标准技术研究所(nist)制定的标准参照品srm 968f血清 进行检测,每个水平重复 2 次取平均值,验证方法准确度。 结果表明,除25-oh-vd2含量较 低未能检出外,其它检测结果与靶值偏差均在 5% 以内,该方法检测结果准确可靠(表 5)。
结论
研究建立了超高效液相色谱串联质谱法同时 测定微量血清样本中多种脂溶性.维生素的方法,并对 前处理过程中的蛋白沉淀试剂、萃取液用量,复溶液 等进行了优化,以减少色谱图中噪音干扰,改善色谱 峰形,提高检测灵敏度。 并比较了不同色谱柱对多种 脂溶性.维生素尤其是不同类型维生素.e 的分离效果, 最终选择 phenomenex kinetex f5 色谱柱,该色谱柱可 以实现 β - 生育酚和 γ - 生育酚的有效分离。 本研究 中只需 20 μl 血清就能够快速完成 6 种脂溶性.维生素 的测定。 该方法测定样本需求量少、操作简单、检测 结果准确快速可实现大量临床样本的同时检测,尤其 对采血较为困难的婴幼儿可以实现少量血液样本检 测多数项目的需求。
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