单个B细胞抗体制备技术原理及技术平台的常见问题解析
单个b细胞抗体制备技术原理：
单个b细胞技术是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术，是根据每一个b细胞只含有一个功能性重链可变区dna序列和一个轻链可变区dna序列，以及每一个b细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性b细胞，通过单细胞pcr技术从单个抗体分泌b细胞中扩增igg重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。这种方法保留了重链和轻链可变区的天然配对，具有基因多样性好、效率高、全天然源性的特点，也成为了目前快速开发针对抗病毒感染性疾病抗体的重要策略。
流式单b细胞分选的技术路线
义翘神州的流式单b细胞分选平台，是从免疫小鼠的脾或者兔子外周血和脾中用流式来分选抗原特异性的单个b细胞。分选后的单细胞有两种处理方式，一种方法是直接裂解细胞进行基因扩增，通过义翘神州自主研发的单b细胞扩增技术，可以实现单b细胞较高的配对成功率。直接裂解扩增单b细胞的方法可以zui大限度地得到阳性克隆，但因为没有早期的介入筛选，会给后续操作增加工作量。另一种处理方式是将分选的单细胞先在体外培养扩增，然后将细胞培养的上清进行elisa或者facs等前期介入检测，再挑选检测的阳性细胞克隆扩增其抗体可变区基因，最后进行抗体的重组表达和验证。
流式b细胞技术平台的常见问题解答
用流式可以一次分选多少个抗原特异性的单个b细胞？
目前，义翘神州的通量是一天可以分选10板抗原特异性的单b细胞。
facs分选单b细胞，除特异性抗原标记外，还需要其他什么surface marker染色？
小鼠b细胞可以用cd19作为表面marker，然后通过igg阳性，igm阴性来分选单细胞。兔子b细胞的表面marker目前信息比较少，分选的时候可以先根据物理参数，比如大小、颗粒度进行分选，然后再根据igg阳性igm阴性以及抗原特异性上进行分选。
培养的记忆b细胞可以分泌抗体吗？需要先增殖后分化成浆细胞吗？
是的，记忆b细胞需要分化成终端的浆细胞，才能分泌抗体
目前义翘神州为大家提供了流式单b细胞分选平台，有需求的客户可以通过cn.sinobiological com/services/platform/facs-b-cell-sorting 来详细了解。
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小鼠b细胞可以用cd19作为表面marker，然后通过igg阳性，igm阴性来分选单细胞。兔子b细胞的表面marker目前信息比较少，分选的时候可以先根据物理参数，比如大小、颗粒度进行分选，然后再根据igg阳性igm阴性以及抗原特异性上进行分选。
培养的记忆b细胞可以分泌抗体吗？需要先增殖后分化成浆细胞吗？
是的，记忆b细胞需要分化成终端的浆细胞，才能分泌抗体
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