泛素特异性蛋白酶Otubain2抗体的生w素化标记实验要点
泛素特异性蛋白酶otubain2抗体的生w素化标记实验要点:
1. 新型血小板相关内皮分泌蛋白scube1抗体费用 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/l碳suan氢钠缓冲液或0.5mol/l硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的nhsb及待生wu素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用nhsb量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此时可加入去污剂如 triton x-100, tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生wu素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生wu素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及ben酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生wu素会对生wu素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
小鼠血管紧张素转化酶(mouse ace)
小鼠雄激素结合蛋白(mouse abp)
小鼠促肾上腺皮质激素(mouse acth)
小鼠active caspase-3
小鼠active caspase-7
小鼠active caspase-8
小鼠激活素a(mouse activin a)
小鼠脂联素(mouse adiponectin)
小鼠抗线粒体抗体(mouse ama)
小鼠抗核抗体(mouse ana)
小鼠血管紧张素ii(mouse ang ii)
小鼠血管生成素-2(mouse angiopoietin-2)
小鼠心钠素(mouse anp)
小鼠凋亡诱导因子(mouse aif)
小鼠抗利尿激素/血管加压素(mouse avp/adh)
小鼠醛固酮(mouse ald)
小鼠白蛋白(mouse albumin)
小鼠血管抑素(mouse angiostatin)
小鼠载脂蛋白e(mouse apo e)
小鼠b淋巴细胞刺激因子(mouse baff)
小鼠凋亡因子bax(mouse bax)
小鼠细胞凋亡相关基因(mouse bcl-2)
小鼠脑衍化神经营养因子(mouse bdnf)
小鼠脑衍化神经营养因子受体(mouse bdnf r)
小鼠骨成型蛋白-2(mouse bmp-2)
小鼠骨成型蛋白-4(mouse bmp-4)
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1. 新型血小板相关内皮分泌蛋白scube1抗体费用 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/l碳suan氢钠缓冲液或0.5mol/l硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的nhsb及待生wu素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用nhsb量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此时可加入去污剂如 triton x-100, tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生wu素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生wu素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及ben酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生wu素会对生wu素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
小鼠血管紧张素转化酶(mouse ace)
小鼠雄激素结合蛋白(mouse abp)
小鼠促肾上腺皮质激素(mouse acth)
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小鼠激活素a(mouse activin a)
小鼠脂联素(mouse adiponectin)
小鼠抗线粒体抗体(mouse ama)
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小鼠血管紧张素ii(mouse ang ii)
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小鼠心钠素(mouse anp)
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