内皮素*说明书
一、概述及临床意义
内皮素是一种（类）由内皮细胞合成的生物活性肽，由21个氨基酸构成。哺乳类动物能合成四种内皮素，包括et-1、et-2、et-3和小鼠内皮素。它们均具有强烈的收缩血管、加强心肌收缩力、加强平滑肌收缩和促进神经内分泌功能等作用。其中又以et-1（以下简称et）活性zui强。内皮素分布于血管平滑肌、肾、心、肺、脑、脊髓灰质、神经、肝、脾、肠、气管以及生殖系统之中，同这些器官上的特异受体有高度亲和力。很多物理、化学和生物因素均能刺激et的大量释放，参加机体的多种病理生理过程。现已证实，et的释放同心血管疾病、神经内分泌疾病、呼吸系统疾病、消化系统及神经系统疾病有密切关系，同时，在创伤、感染和休克等损伤过程中也发挥重要作用。目前，国内外均已开始将et水平作为临床观察上述系统疾病发生、发展的重要生化指标。
本药盒用于测定人血浆中的et含量，属于体外放免诊断药盒。
二、测定原理
应用竞争机制原理，标准或样品中的et和加入的125i-et 共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125i-et与抗体的结合量与标准或样品中et的含量呈一定的函数关系。用免疫分离试剂（p.r.）将结合部分（b）与游离部分（f）分离后，测定结合部分的放射性强度，并计算相应结合率b/b0。用已知标准et含量与对应结合率作图，即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中et的含量。
三、药盒组成
规格
组分
100管
50管
制品状态
et标准品（s1-s5）
5瓶
5瓶
冻干品
125i-et（红色）
2瓶
1瓶
冻干品
兔抗-et抗血清（兰色）
1瓶
1瓶
冻干品
驴抗兔免疫分离剂
1瓶/55ml
1瓶/28ml
液体
et缓冲液
1瓶/40ml
1瓶/40ml
液体
edta抗凝剂
1瓶/3ml
1瓶/3ml
液体
四、试剂的配制、使用方法和保存
1． et标准品：使用前用缓冲液1ml充分溶解，摇匀。冻干品2~8℃避光保存，在标识的有效期内稳定；复溶后-20℃保存在该批药盒有效期内稳定。
2． 125i-et：使用前每瓶用5.5ml缓冲液溶解，摇匀。如一次加样超过50管，两瓶溶解后合并使用。冻干品2~8℃避光保存，在标识的有效期内稳定；复溶后-20℃保存在该批药盒有效期内稳定。
3．兔抗-et 抗体：使用前用缓冲液（100管 ml，50管 ml） 溶解，摇匀。冻干品2~8℃保存在标识的有效期内稳定；复溶后2~8℃保存在该批药盒有效期内稳定。
4．驴抗兔免疫分离剂：2~8℃保存，在标识的有效期内稳定。加样前必须充分摇匀！
5． et缓冲液：2~8℃保存，在标识的有效期内稳定。
6． edta抗凝剂：液体，直接使用。如果有沉淀析出，摇匀后置温育箱中加热待其溶解后使用。置2~8℃或室温保存皆可，在标识的有效期内使用。
注：标准品、标记物复溶并加样完毕后要及时放在-20℃条件下冰冻保存，保证下次使用时的可靠性。
五、样本处理
取静脉血2ml，拔下针头后，沿管壁慢慢注入含10%edta 30ul带塞的试管中，上下颠倒两次，混匀。室温放置约1小时或4℃放置约2小时后，3000rpm离心10分钟（室温或4℃皆可），分离血浆，待测。如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过12小时，-20℃保存不超过2个月，-70℃保存不超过6个月。冰冻样品测定前，使样本置于室温或常温水中复融，测定前将样品充分摇匀。
六、测定步骤
取圆底聚苯乙烯试管若干，用记号笔或特殊铅笔编号t、nsb，s0~s5和待测样品管等，然后用微量加样器按下表加样。加样前所有试剂包括血浆样品平衡到室温并充分摇匀！
操作程序表 单位：μl
管别
试剂
总t
nsb
s0
s1~s5
待测样品
缓冲液
—
200
100
—
—
et标准品
—
—
—
100
—
待测样品
—
—
—
—
100
125i-et
100
100
100
100
100
兔抗-et 抗体
—
—
100
100
100
摇匀，4~8℃温育18~24小时。
驴抗兔免疫分离剂
—
500
500
500
500
充分摇匀，室温放置15分钟，3500转/分钟离心15分钟，吸弃上清，测各沉淀管的放射性计数（cpm）。
七、数据处理
1. 联机处理：由电脑自动处理得出结果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，处理软件也不一样，用户一定要使用适合的处理软件进行数据处理。在此建议用户使用logit-log或四参数数据处理模式。
2. 手工作图或计算器处理：
1）. 百分结合率计算：设s0管计数为b0，各标准管或样品管计数为b，非特异管计数为nsb，则百分结合率计算公式为：b/ b0=（b－nsb）/（ b0－nsb）×100%
2）. logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式为： logit=ln（b/ b0）/（1－b/ b0）
3）. 手工作图：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的b/b0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样品的b/b0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意：如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是zui后的浓度值。
4）. 计算器处理：使用有线性拟合功能的计算器，可以比较方便地计算出样品浓度值，具体操作方法请查阅计算器的使用说明书。
标准曲线举例（仅供参考，不得用于实际计算）。
项目
b/t
b/b0（浓度单位ng/ml）
nsb
零标准
20
60
180
540
1620
%
1.5
55.6
88.4
74.1
51.5
29.1
13.4
八、药盒主要技术指标
1．标准范围：20~1620pg/ml
2．灵敏度：5pg/ml
3．批内变异系数（cv）：<10%; 批间变异系数（cv）：<15%。
4．使用期限：见产品外包装。
九、参考正常值：
参考正常值：53.14±15.23pg/ml
由于地区及使用仪器不同，所测的正常值会存在一定的差异，所以本说明书提供的正常值仅作参考，各实验室能建立符合本实验室要求的正常值范围。
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本药盒用于测定人血浆中的et含量，属于体外放免诊断药盒。
二、测定原理
应用竞争机制原理，标准或样品中的et和加入的125i-et 共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125i-et与抗体的结合量与标准或样品中et的含量呈一定的函数关系。用免疫分离试剂（p.r.）将结合部分（b）与游离部分（f）分离后，测定结合部分的放射性强度，并计算相应结合率b/b0。用已知标准et含量与对应结合率作图，即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中et的含量。
三、药盒组成
规格
组分
100管
50管
制品状态
et标准品（s1-s5）
5瓶
5瓶
冻干品
125i-et（红色）
2瓶
1瓶
冻干品
兔抗-et抗血清（兰色）
1瓶
1瓶
冻干品
驴抗兔免疫分离剂
1瓶/55ml
1瓶/28ml
液体
et缓冲液
1瓶/40ml
1瓶/40ml
液体
edta抗凝剂
1瓶/3ml
1瓶/3ml
液体
四、试剂的配制、使用方法和保存
1． et标准品：使用前用缓冲液1ml充分溶解，摇匀。冻干品2~8℃避光保存，在标识的有效期内稳定；复溶后-20℃保存在该批药盒有效期内稳定。
2． 125i-et：使用前每瓶用5.5ml缓冲液溶解，摇匀。如一次加样超过50管，两瓶溶解后合并使用。冻干品2~8℃避光保存，在标识的有效期内稳定；复溶后-20℃保存在该批药盒有效期内稳定。
3．兔抗-et 抗体：使用前用缓冲液（100管 ml，50管 ml） 溶解，摇匀。冻干品2~8℃保存在标识的有效期内稳定；复溶后2~8℃保存在该批药盒有效期内稳定。
4．驴抗兔免疫分离剂：2~8℃保存，在标识的有效期内稳定。加样前必须充分摇匀！
5． et缓冲液：2~8℃保存，在标识的有效期内稳定。
6． edta抗凝剂：液体，直接使用。如果有沉淀析出，摇匀后置温育箱中加热待其溶解后使用。置2~8℃或室温保存皆可，在标识的有效期内使用。
注：标准品、标记物复溶并加样完毕后要及时放在-20℃条件下冰冻保存，保证下次使用时的可靠性。
五、样本处理
取静脉血2ml，拔下针头后，沿管壁慢慢注入含10%edta 30ul带塞的试管中，上下颠倒两次，混匀。室温放置约1小时或4℃放置约2小时后，3000rpm离心10分钟（室温或4℃皆可），分离血浆，待测。如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过12小时，-20℃保存不超过2个月，-70℃保存不超过6个月。冰冻样品测定前，使样本置于室温或常温水中复融，测定前将样品充分摇匀。
六、测定步骤
取圆底聚苯乙烯试管若干，用记号笔或特殊铅笔编号t、nsb，s0~s5和待测样品管等，然后用微量加样器按下表加样。加样前所有试剂包括血浆样品平衡到室温并充分摇匀！
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管别
试剂
总t
nsb
s0
s1~s5
待测样品
缓冲液
—
200
100
—
—
et标准品
—
—
—
100
—
待测样品
—
—
—
—
100
125i-et
100
100
100
100
100
兔抗-et 抗体
—
—
100
100
100
摇匀，4~8℃温育18~24小时。
驴抗兔免疫分离剂
—
500
500
500
500
充分摇匀，室温放置15分钟，3500转/分钟离心15分钟，吸弃上清，测各沉淀管的放射性计数（cpm）。
七、数据处理
1. 联机处理：由电脑自动处理得出结果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，处理软件也不一样，用户一定要使用适合的处理软件进行数据处理。在此建议用户使用logit-log或四参数数据处理模式。
2. 手工作图或计算器处理：
1）. 百分结合率计算：设s0管计数为b0，各标准管或样品管计数为b，非特异管计数为nsb，则百分结合率计算公式为：b/ b0=（b－nsb）/（ b0－nsb）×100%
2）. logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式为： logit=ln（b/ b0）/（1－b/ b0）
3）. 手工作图：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的b/b0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样品的b/b0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。注意：如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是zui后的浓度值。
4）. 计算器处理：使用有线性拟合功能的计算器，可以比较方便地计算出样品浓度值，具体操作方法请查阅计算器的使用说明书。
标准曲线举例（仅供参考，不得用于实际计算）。
项目
b/t
b/b0（浓度单位ng/ml）
nsb
零标准
20
60
180
540
1620
%
1.5
55.6
88.4
74.1
51.5
29.1
13.4
八、药盒主要技术指标
1．标准范围：20~1620pg/ml
2．灵敏度：5pg/ml
3．批内变异系数（cv）：<10%; 批间变异系数（cv）：<15%。
4．使用期限：见产品外包装。
九、参考正常值：
参考正常值：53.14±15.23pg/ml
由于地区及使用仪器不同，所测的正常值会存在一定的差异，所以本说明书提供的正常值仅作参考，各实验室能建立符合本实验室要求的正常值范围。
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