什么是fc融合蛋白?
fc融合蛋白是一种由免疫球蛋白(如igg、iga等)的fc片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将fc区域与其他蛋白质或肽段融合,可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能,同时利用fc区域的稳定性和免疫系统的fc受体相互作用,增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如,普通重组il-2的体内半衰期较短,只有6.9分钟,这限制了其在体内的持续作用时间。然而,通过与免疫球蛋白的fc片段融合,重组il-2/fc融合蛋白在体内半衰期延长了近700倍,从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外,延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率,减少潜在的副作用和毒性。
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融合蛋白有哪些?
融合蛋白是一种由至少两个结构域组成的蛋白,这些结构域由被连接起来的独立基因编码,因此能够作为一个单元被转录和翻译,产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备,也被称为“标签”(参阅重组蛋白标签的完整列表)。因此,融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。
大体上有两种类型的融合蛋白:一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合,通常由一个linker连接,第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。
融合蛋白应用:
融合蛋白最重要的三个用途是:
1.作为克隆基因纯化的辅助手段
2.作为报告的表达水平
3.作为组织化学标签,使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化
融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化,如葡萄球菌蛋白a、谷胱甘肽-s-转移酶(gst)、麦芽糖结合蛋白(mbp)和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白常用作报告构建体的融合伙伴,包括 β-半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 (gfp)。
荧光融合蛋白
在融合蛋白中,最多的一类称为荧光蛋白,如绿色荧光蛋白(gfp)、橙色荧光蛋白(ofp)和黄色荧光蛋白(yfp)。 绿色荧光蛋白 (gfp) 等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。
绿色荧光蛋白(gfp)是一种荧光蛋白,最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同,gfp 具有不需要任何底物、荧光素以及 atp、o2 或 mg2+ 的优势。 gfp 在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光,在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体,从而确保 gfp 作为自发荧光蛋白的功能。
融合蛋白标签
在融合标签中,既有短序列(如 polyhis、polyarg、flag、c-myc、streptag 等),也有大蛋白(gst、mbp 等)。 在许多情况下,短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性,而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同,需要从重组构建体中去除大的融合标签。
有许多融合标签,既包含经过充分验证的标签,也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。
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