如何选择蛋白表达系统?

在蛋白表达系统的相关研究中,从头合成蛋白质并不是一个可行的选择。因此需要借助活细胞或细胞器用作生产和构建蛋白质的工厂。那么你知道该如何选择蛋白表达系统吗?让我们一起来看看吧!
目前,较为主流的表达宿主有大肠杆菌(e.coli)、毕赤酵母(p.pastoris)、昆虫-杆状病毒(bac-to-bac系统)以及哺乳动物细胞系(cho、hek293)等。
一、细菌
优点:
1. 遗传背景清楚;
2. 繁殖快、成本低、抗污染能力强;
3. 表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好;4. 商品化的载体和菌株种类非常齐全、适用范围广等。
缺点:
1. 没有真核转录后加工的功能,没有翻译后修饰;
2. 表达的蛋白质经常是不溶的,容易形成包涵体;
3. 有一些真核蛋白的产量和活性较低;
4. 难以表达大分子哺乳动物蛋白质;
5. 可能会产生一些致热源(内毒素)
二、酵母
优点:
1. 结合了真核和原核的优点,可生产翻译后修饰的分泌蛋白和胞内蛋白;
2. 经济高效,部分真核翻译后修饰,如糖基化,磷酸基化。
缺点:
1. 可能形成不正确的蛋白糖基化;
2. 培养上清多糖浓度高不利于纯化
三、哺乳动物稳定表达系统
优点:
1. 蛋白活性:翻译后再加工修饰折叠的功能产生的外源蛋白质,更接近于蛋白质的天然状态。
2.正确的高级结构(如糖基化)。
3.在蛋白的起始信号、加工、分泌、糖基化方面具有优势,适合表达完整的大分子蛋白。
缺点:
培养基成本高,培养周期长,至少一个月以上,培养较困难,表达量较低。构成复杂、操作技术要求高、表达产量不大、产率低
四、哺乳动物瞬时表达系统
优点:
1. 适度快速表达
2. 很好表达膜蛋白和分泌蛋白
3. 所有蛋白都能进行折叠和最真实的翻译后修饰
缺点:
1. 比较贵
2. 胞内蛋白产量低
总之,各种表达系统各有优缺点,因此,选择表达系统时,应充分考虑各种因素更多有关蛋白表达系统的选择问题,请联系天津益元利康科技有限公司:

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