影响凝胶电泳仪移动的因素
一、凝胶电泳仪-影响凝胶电泳仪移动的因素
琼脂糖主要在dna制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性ph值下带负电荷的dna向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定。
二、主要的因素有哪些
1、 dna的分子大小
线状双链dna分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与dna分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。
2、 琼脂糖浓度
一个给定大小的线状dna分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。dna电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于dna分子的大小。分离小于0.5kb的dna片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的dna分子所需胶浓度为0.3-0.7%, dna片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
3、 dna分子的构象
dna分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋dna在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋dna移动最快,而开环双链dna移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条dna带难以确定是质粒dna不同构象引起还是因为含有其他dna引起时,可从琼脂糖凝胶上将dna带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的dna图谱,则为同一种dna。
4、 电源电压
在低电压时,线状dna片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的dna片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的dna片段有效分离所加电压不得超过5v/cm。
5、嵌入染料的存在
荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的dna,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状dna，使其刚性更强,还会使线状dna迁移率降低15%。
6、离子强度影响
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响dna的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,dna几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或dna变性。 对于天然的双链dna,常用的几种电泳缓冲液有tae[含edta (ph8.0)和tris-乙酸],tbe(tris-硼酸和edta),tpe(tris-磷酸和edta),一般配制成浓缩母液,储于室温。
三、代表产品
六一电泳仪-dycz-20h型;六一电泳仪-dycz-20g型;六一多用途电泳仪-dycz-21型;六一电泳仪dycz-20f型等。
按支持物的物理性状不同,电泳可分为
1、滤纸为支持物的纸电泳；
2、粉末电泳: 如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳；
3、凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳；
4、缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳。
农药残留检测仪器普遍检测误差的原因和解决办法
继电器模块3500/33轴向振动卡
Biotin-PEG9-azide 生物素-九聚乙二醇-叠氮 Biotin-PEG9-N3的描述
出口滑托板在使用的过程中需要注意些什么！
企业如何选择适合自己的仓储货架
影响凝胶电泳仪移动的因素
德国FESTO费托斯气缸工作原理
本特利 3500/42M卡件
BURKERT隔膜调节阀的流量特性接近快开特性
动物中的DNA免疫概述，猪血清助力科研
三蒸水机的使用
弹簧硬度检测法
软化水设备树脂的化学分析与处理
立式搅拌机的操作说明及性能参数
WQ27-5Y烟度计/尾气分析仪/不透光烟度计技术指标
数控车床的液压动力站分析
冷冻冷藏组合冰箱的特点和优势
旷视科技Face＋＋“城市大脑”布局走出
小型加工中心是什么？
X型旋片式真空泵的特点及用途
琼脂糖主要在dna制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性ph值下带负电荷的dna向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定。
二、主要的因素有哪些
1、 dna的分子大小
线状双链dna分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与dna分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。
2、 琼脂糖浓度
一个给定大小的线状dna分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。dna电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于dna分子的大小。分离小于0.5kb的dna片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的dna分子所需胶浓度为0.3-0.7%, dna片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
3、 dna分子的构象
dna分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋dna在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋dna移动最快,而开环双链dna移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条dna带难以确定是质粒dna不同构象引起还是因为含有其他dna引起时,可从琼脂糖凝胶上将dna带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的dna图谱,则为同一种dna。
4、 电源电压
在低电压时,线状dna片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的dna片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的dna片段有效分离所加电压不得超过5v/cm。
5、嵌入染料的存在
荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的dna,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状dna，使其刚性更强,还会使线状dna迁移率降低15%。
6、离子强度影响
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响dna的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,dna几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或dna变性。 对于天然的双链dna,常用的几种电泳缓冲液有tae[含edta (ph8.0)和tris-乙酸],tbe(tris-硼酸和edta),tpe(tris-磷酸和edta),一般配制成浓缩母液,储于室温。
三、代表产品
六一电泳仪-dycz-20h型;六一电泳仪-dycz-20g型;六一多用途电泳仪-dycz-21型;六一电泳仪dycz-20f型等。
按支持物的物理性状不同,电泳可分为
1、滤纸为支持物的纸电泳；
2、粉末电泳: 如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳；
3、凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳；
4、缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳。
农药残留检测仪器普遍检测误差的原因和解决办法
继电器模块3500/33轴向振动卡
Biotin-PEG9-azide 生物素-九聚乙二醇-叠氮 Biotin-PEG9-N3的描述
出口滑托板在使用的过程中需要注意些什么！
企业如何选择适合自己的仓储货架
影响凝胶电泳仪移动的因素
德国FESTO费托斯气缸工作原理
本特利 3500/42M卡件
BURKERT隔膜调节阀的流量特性接近快开特性
动物中的DNA免疫概述，猪血清助力科研
三蒸水机的使用
弹簧硬度检测法
软化水设备树脂的化学分析与处理
立式搅拌机的操作说明及性能参数
WQ27-5Y烟度计/尾气分析仪/不透光烟度计技术指标
数控车床的液压动力站分析
冷冻冷藏组合冰箱的特点和优势
旷视科技Face＋＋“城市大脑”布局走出
小型加工中心是什么？
X型旋片式真空泵的特点及用途