PMA-qPCR/Viability PCR工作原理&相关推荐
pma是比较中肯的v-pcr染料，并已在数百份同行评审的论文和大量细菌、真菌和病毒菌株中得到验证。早期研究侧重于细菌中的v-pcr，验证了在数十种不同细菌菌株中的程序，例如大肠杆菌、李斯特菌、军团菌、乳酸杆菌、结核分枝杆菌、衣原体、幽门螺杆菌以及许多其他与人类健康相关的菌株. v-pcr在细菌中的应用非常广泛，但也有许多引文在酵母和真菌、病毒以及各种其他细胞类型（如古生菌、变形虫和寄生虫）中使用v-pcr。
已验证的viability pcr应用实例：
微生物组研究
环境测试
益生菌研究
临床测试
食品和水卫生
葡萄酒发酵
微生物测序
v-pcr的工作原理
pmaxx和pma是对dna具有高亲和力的光活性染料。染料插入dsdna并在暴露于强烈可见光时形成共价键。该反应通过在纯化过程中去除修饰的dna和通过dna聚合酶抑制模板扩增的组合来抑制修饰的dna模板的pcr扩增。由于染料是细胞膜不可渗透的，当用染料处理含有活细菌和死细菌的样品时，只有细胞膜受损的死细菌才容易受到dna修饰。在qpcr反应中，死细胞dna将显示出延迟扩增和比活细胞更高的ct。
活性pcr染料，如pmaxx或pma是膜不渗透的，这使它们具有死细胞特异性。一旦进入死细胞，它们就会与dna结合。暴露在强烈的可见光下会使染料具有活性，并使它们共价附着在dna上，这种dna修饰防止了随后的pcr反应中的扩增。
v-pcr工作流程：
v-pcr的基本工作流程如下图所示（详细协议可在产品页面上找到）。它适用于许多不同的样本类型和实验设置。对于少量培养物，样品可以在微型离心管中制备，并在pma-lite 2.0 led光解装置中暴露在光下。
艾美捷viability pcr入门套件
可定制的viability pcr入门套件包含使用pma或pmaxx活力染料和qpcr选择性检测活细胞所需的材料。这些试剂盒可用于您选择的任何细胞类型（有关已发布的经过验证的细胞类型，请参阅pma/pmaxx参考列表和经过验证的细菌菌株列表）。所有试剂盒均包含forget-me-not evagreenqpcr master mix，以及您选择的pma或pmaxx染料。您还可以选择带有或不带有革兰氏阴性细菌增强剂（不适用于其他细胞类型）的试剂盒。用户将需要提供自己的引物来扩增他们感兴趣的物种（请参阅此 博客文章 用于引物设计考虑）。每个试剂盒包含的试剂足以处理80种细菌培养物并进行200次pcr反应。
试剂盒包括：
pma染料或pmaxx染料
forget-me-not evagreen qpcr预混液
rox参考染料
pma增强剂（仅限革兰氏阴性菌株）
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活性pcr染料，如pmaxx或pma是膜不渗透的，这使它们具有死细胞特异性。一旦进入死细胞，它们就会与dna结合。暴露在强烈的可见光下会使染料具有活性，并使它们共价附着在dna上，这种dna修饰防止了随后的pcr反应中的扩增。
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