特殊石蜡切片总胆固醇（酯酶法）菲律宾（FILIPIN）荧光直接染色试剂盒
特殊石蜡切片总胆固醇（酯酶法）菲律宾（filipin）荧光直接染色试剂盒
产品说明书
主要用途
特殊石蜡切片总胆固醇（酯酶法）菲律宾（filipin）荧光直接染色试剂是一种旨在通过特殊脱蜡处理，进而使用胆固醇酯酶水解和荧光染料菲律宾（filipin）特异性与游离胆固醇反应，形成复合体，并产生蓝色荧光，分析石蜡包埋组织切片中总胆固醇的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片中总胆固醇的检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。菲律宾（filipin）是一类由四种同分异构体的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多马霉素（polyene macrolide）的总称。源自于s. filipinensis细菌的培养液中。其分子式为c35h58o11，分子量为654.8。首先在胆固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化胆固醇（cholesterel ester）转化为游离胆固醇，然后使用菲律宾与所有游离胆固醇结合形成聚集体或复合物，产生荧光。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此使用非二甲苯类脱蜡，以保护组织中的胆固醇成分是菲律宾染色的关键。
产品内容
脱蜡液（reagent a） 20毫升
净化液（reagent b） 5毫升
清理液（reagent c） 20毫升
水解液（reagent d） 4毫升
抗干扰液（reagent e） 4毫升
染色液（reagent f） 2毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存水解液（reagent d）和染色液（reagent f）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
荧光显微镜：用于样品染色后观察分析
实验步骤
一、脱蜡处理
1．取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
2．放进80℃烘箱，孵育30分钟
3．取出组织切片
4．小心加上500微升脱蜡液（reagent a）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：使用前，摇匀脱蜡液）
5．放进70℃恒温培养箱里孵育5分钟
6．即刻小心移去切片上的脱蜡液（reagent a）
7．（选择步骤）重复实验步骤2至4一次
8．小心加上200微升净化液（reagent b）在切片上，铺满整个切片样品表面
9．室温下孵育2分钟
10．小心移去切片上的净化液（reagent b）
11．进一步依次常规净化处理：用户自备的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
12．小心加上200微升清理液（reagent c）在切片上，铺满整个切片样品表面
13．室温下孵育3分钟
14．小心移去切片上的清理液（reagent c）
三、样本染色处理
1．小心加入200微升水解液（reagent c），铺满整个样品表面
2．室温下孵育1小时（注意：可以延长至4小时，避免干枯）
3．小心移去水解液（reagent d）
4．小心加入200微升清理液（reagent c），清洗样品表面
5．小心移去清理液（reagent c）
6．重复实验步骤4至5一次
7．小心加上200微升抗干扰液（reagent e），铺满整个切片样品表面
8．室温下孵育10分钟
9．小心移去切片上的抗干扰液（reagent e）
10．小心加上100微升染色液（reagent f），铺满整个切片样品表面
11．室温下孵育30分钟，避免光照
12．小心移去切片上的染色液（reagent f）
13．小心加上200微升清理液（reagent c），清洗样品表面
14．小心移去切片上的清理液（reagent c）
15．重复实验步骤13至14二次
16．即刻放上盖玻片或封片
17．在荧光显微镜下观察：激发波长：340nm；散发波长：430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光
注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
4．操作时，避免污染母液
5．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
6．荧光容易受到光漂白（photobleach），建议使用抗淬灭剂ⅰ－12058.2
7．样品染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
8．本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰
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产品内容
脱蜡液（reagent a） 20毫升
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清理液（reagent c） 20毫升
水解液（reagent d） 4毫升
抗干扰液（reagent e） 4毫升
染色液（reagent f） 2毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存水解液（reagent d）和染色液（reagent f）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
荧光显微镜：用于样品染色后观察分析
实验步骤
一、脱蜡处理
1．取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
2．放进80℃烘箱，孵育30分钟
3．取出组织切片
4．小心加上500微升脱蜡液（reagent a）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：使用前，摇匀脱蜡液）
5．放进70℃恒温培养箱里孵育5分钟
6．即刻小心移去切片上的脱蜡液（reagent a）
7．（选择步骤）重复实验步骤2至4一次
8．小心加上200微升净化液（reagent b）在切片上，铺满整个切片样品表面
9．室温下孵育2分钟
10．小心移去切片上的净化液（reagent b）
11．进一步依次常规净化处理：用户自备的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
12．小心加上200微升清理液（reagent c）在切片上，铺满整个切片样品表面
13．室温下孵育3分钟
14．小心移去切片上的清理液（reagent c）
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1．小心加入200微升水解液（reagent c），铺满整个样品表面
2．室温下孵育1小时（注意：可以延长至4小时，避免干枯）
3．小心移去水解液（reagent d）
4．小心加入200微升清理液（reagent c），清洗样品表面
5．小心移去清理液（reagent c）
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8．室温下孵育10分钟
9．小心移去切片上的抗干扰液（reagent e）
10．小心加上100微升染色液（reagent f），铺满整个切片样品表面
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13．小心加上200微升清理液（reagent c），清洗样品表面
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17．在荧光显微镜下观察：激发波长：340nm；散发波长：430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光
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2．操作时，须戴手套
3．建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
4．操作时，避免污染母液
5．试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
6．荧光容易受到光漂白（photobleach），建议使用抗淬灭剂ⅰ－12058.2
7．样品染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
8．本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品
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