BCA法测定蛋白质浓度

掌握bca法测定蛋白质浓度的原理。
【原理】
bca(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他 试剂 组成的 试剂 ，混合一起即成为苹果绿，即bca工作试剂。在碱性条件下，bca与蛋白质结合时，蛋白质将cu2+ 还原为cu+ ，一个cu+ 螯合二个bca分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
【操作】
标准曲线的绘制：取 试管 七支、编号，按下表操作：
【计算】
（一） 绘制标准曲线。
（二） 以测定管吸光度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度(g/l)。
（三） 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度(g/l)。
【优缺点】
(一) 操作简单，快速，45分钟内完成测定，比经典的lowary法快4倍且更加方便；
(二) 准确灵敏，试剂稳定性好，bca试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml，微量bca测定范围在0.5-10μg/ml。
(三) 经济实用，除 试管 外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量；
(四) 抗试剂干扰能力比较强，如去垢剂，尿素等均无影响
【器材】
（一） 7220型分光光度计
（二） 恒温 水浴 箱
（三） 中试管7支
（四） 枪式移液管
【试剂】
1、 试剂a：1％bca二钠盐
2％无水碳酸钠
0.16%酒石酸钠
0.4％氢氧化钠
0.95％碳酸氢钠
混合调ph值至11.25。
2、 试剂b：4％硫酸铜。
3、 bca工作液：试剂a 100ml ＋ 试剂b 2ml混合
4、 蛋白质标准液：用结晶牛 血清 白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）
5、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。

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