掌握bca法测定蛋白质浓度的原理。
【原理】
bca(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他 试剂 组成的 试剂 ,混合一起即成为苹果绿,即bca工作试剂。在碱性条件下,bca与蛋白质结合时,蛋白质将cu2+ 还原为cu+ ,一个cu+ 螯合二个bca分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
【操作】
标准曲线的绘制:取 试管 七支、编号,按下表操作:
【计算】
(一) 绘制标准曲线。
(二) 以测定管吸光度值,查找标准曲线,求出待测血清中蛋白质浓度(g/l)。
(三) 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者,求出待测血清中蛋白质浓度(g/l)。
【优缺点】
(一) 操作简单,快速,45分钟内完成测定,比经典的lowary法快4倍且更加方便;
(二) 准确灵敏,试剂稳定性好,bca试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml,微量bca测定范围在0.5-10μg/ml。
(三) 经济实用,除 试管 外,测定可在微板孔中就进行,大大节约样品和试剂用量;
(四) 抗试剂干扰能力比较强,如去垢剂,尿素等均无影响
【器材】
(一) 7220型分光光度计
(二) 恒温 水浴 箱
(三) 中试管7支
(四) 枪式移液管
【试剂】
1、 试剂a:1%bca二钠盐
2%无水碳酸钠
0.16%酒石酸钠
0.4%氢氧化钠
0.95%碳酸氢钠
混合调ph值至11.25。
2、 试剂b:4%硫酸铜。
3、 bca工作液:试剂a 100ml + 试剂b 2ml混合
4、 蛋白质标准液:用结晶牛 血清 白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)
5、 待测样品:用双缩脲测定法的样品稀释而成。
激光切割机在水晶、玉石上的应用
了解与认识冷凝水回收装置
医疗移印机 自动上料 自动印刷苏州欧可达专业生产移印机厂家
啤酒浊度仪的应用和特点
飞行激光打标机的优点
BCA法测定蛋白质浓度
介电常数介质损耗测试仪的使用方法
恒奥德仪器新款涂布机的用途原理工作流程
便携光学法接触角的产品优势
数显恒温水浴 恒温水浴箱的使用说明
泰克示波器如何处理有噪声的信号?
中子剂量当量率仪的详细介绍
塑胶跑道什么时候需要翻新,塑胶跑道翻新方法
中研紫光减速电机 清华紫光RV减速机制造
快速排障1200℃箱式电炉
大隈OKUMA系统参数错误引起报警的故障维修
基于贝叶斯群判断理论的CNC加工中心装配可靠性保障方法研究
玻璃管制注剂瓶检测仪器满足那些标准
锅炉除垢剂性能介绍
楼宇访客定位系统相关信息