蜂蜜中*的检测、确认和定量-Agilent 1260 液相色谱系统
摘要：本应用简报介绍了使用 agilent 1260 infinity ii 液相色谱与 agilent ultivo lc/tq 的联用系统分析蜂蜜样品中皮克级的极低含量* (cap)。此方法采用 agilent ultivo lc/tq 开发，尽管该系统体积小巧，但结果毫不逊色。此应用是食品行业中蜂蜜生产、加工和商业化样品常规检测的理想选择，也十分适合用于学术研究目的。使用基于液液萃取 (lle) 的简单样品前处理方法，能够成功实现基质中 50 ppt 的定量限 (loq)。
前言： cap 是一种能够抑制蛋白质合成的广谱抗生素，*接触会导致罕见且严重的血液疾病（再生障碍性贫血）以及骨髓损伤。由于 cap 对人体具有明显的毒性作用，因此食品中的含量不得高于 0.3 ppb 的低性能要求限值 (mrpl)[1,2]。实验部分本研究采用以下溶剂：乙腈（honeywell， lc/ms，货号 34967）；甲醇（honeywell， lc/ms，货号 34966）；水（millipore， milli-q）；乙酸乙酯（分析纯，rankem）；*（安捷伦科技公司，货号 5091- 0591）。cap 的所有工作稀释液均采用 100% 甲醇配制。图 1. cap 和氘代 cap ho ho h o o –o + n n cl cl ho ho h d d d d d o o –o + n n cl cl * d5-*三重四极杆 lc/ms 系统是美国、欧盟、 fssai 和其他/地区用于确认蜂蜜中 cap 的金标准。本应用采用新款三重四极杆 lc/ms 系统 ultivo lc/tq。使用 ultivo lc/tq 获得的灵敏度优于欧盟食品法规规定的 mrpl。此工作流程仅使用 lle，而传统方法需要结合 lle 和固相萃取 (spe)。由于省去了 spe 步骤，我们实现了一种简单、省时的高性价比解决方案（图 2）[3,4,5]。通过采用结构相似的 cap-d5 作为内标以减少变异，这一基于 ultivo lc/tq 的解决方案展现出了优异的特异性、线性和稳定性，能够提供可靠的结果。
结果与讨论由于规定的 mrpl 为 300 ppt，大多数分析实验室普遍将 100 ppt 设置为常规 loq。所提出的方法的检测限 (lod) 为 25 ppt。但是，考虑到蜂蜜产品的多样性，建议的 loq 为 50 ppt。图 3 的 mrm 色谱图展示了稀释剂空白、lod 和 loq。此外，通过进样各种浓度的 cap 稀释液，获得了可重现的洗脱曲线，如图 4 所示。表 2 显示了六次重复测定获得的 cap 浓度计算值的变异系数 (cv%) 数据。
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