寡核苷酸类药物检测之尺寸排阻（SEC）色谱柱
寡核苷酸类药物检测之尺寸排阻（sec）色谱柱随着寡核苷酸药物的研发步伐越来越快，对高纯度寡核苷酸产品的需求也日趋旺盛。在今天的推送内容里，我们将介绍尺寸排阻色谱法在寡核苷酸药物质量控制中的应用。
在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分离模式是基于碱基数量、磷酸基不同导致的分子量差别进行分离，通常用于简单的质量控制或纯度研究。该模式的优点是可以使用接近生理条件的洗脱溶液进行等度分离。有时也会添加水溶性有机溶剂来抑制疏水吸附。
分析不同碱基数目的寡核苷酸
下图是采用两根串联的sec色谱柱tskgel up-sw2000来区分长度相差一个碱基的寡核苷酸混合物 (20-mer和n-1 19-mer)。
tskgel up-sw2000是东曹生命科学最新开发的粒径2μm、孔径12.5nm的硅胶基质sec色谱柱，主要用于分离分子量范围为1-150kda的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。该色谱柱兼容hplc和uhplc系统，因此也能够从传统的hplc-sec方法转换到uhplc。
下图是使用tskgel g2000swxl色谱柱分离不同碱基数量的合成寡核苷酸混合物的谱图。为了抑制核酸酶活性，有时会在流动相中添加edta等约1 mmol/l的螯合剂。
sec法分离脂质体包被的sirna
下图是使用tskgel supersw2000色谱柱对天然型dna核酸药物defitelio进行质量分析的示例。
参考文献：handbook of analysis of oligonucleotides and related products, feb.23 (2011) 125, edited by j.v. bonilla et al.
寡核苷酸分析用sec色谱柱
下表中列出了适用于核酸分离的sec色谱柱。对于＜375 bp的短链核酸或寡核苷酸，up-sw3000、up-sw2000、g3000swxl以及g2000swxl这几款色谱柱都是比较推荐的。
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