产品简介
本试剂盒采用特异性结合dna的离心吸附柱和缓冲系统,能从多种植物组织中分离纯化高质量基因组dna,沉淀溶液可以沉淀去除多糖多酚植物样本中的蛋白质、多糖以及酚类等杂质。提取的基因组dna纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的基因组dna适用于各种常规操作,包括酶切、pcr、文库构建、 southern杂交、芯片检测、高通量测序等实验。
产品特点
• 简便快捷:1 h内即可获得高纯度的基因组dna
• 适用广泛:适用于多种植物组织,尤其是多糖多酚植物
• 安全低毒:无需酚/氯仿等有毒有机试剂
• 纯度较高:获得的dna纯度高,可直接用于芯片检测、高通量测序等实验
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中孵育10min,以溶解沉淀。
实验例
用dp360与a和q公司相应试剂盒按各说明书操作对100mg海棠叶片和桃树叶片组织进行dna提取。m:tiangen marker d15000。洗脱体积为100µl,琼脂糖凝胶电泳上样量为3µl。试验结果表明,dp360具有更高的提取得率。
操作步骤
使用前请先在去蛋白液rd和漂洗液pw中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签。
1. 取植物组织加入液氮充分研磨,称取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg。
2. 向研磨好的粉末中迅速加入400 µl缓冲液gps和10 µl rnase a(10 mg/ml),迅速涡旋
混匀后,将离心管放在65 ℃水浴15 min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
注意:若裂解后溶液粘稠,可以适量加大gps使用量,同时在步骤3中增加缓冲液gpa的
使用量,最终gps和gpa的体积比为4:1。
3. 加入100 µl缓冲液gpa,涡旋振荡1 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心5 min,转移
上清至过滤柱cs中(过滤柱cs放在收集管中),然后12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1
min ,转移滤液至新的离心管中。
注意:若裂解后溶液粘稠,加入缓冲液gpa涡旋混匀后将离心管置于冰上静置5min,然
后再离心。
4. 加入等体积的无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都转移到rnase-free吸附柱cr2中(吸附柱cr2放在收集
管中),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,rnase-free吸附柱cr2放入
收集管中。
6. 向rnase-free吸附柱cr2中加入550 μl去蛋白液rd(使用前请先检查是否已加入无水乙
醇),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,将rnase-free吸附柱cr2放入
收集管中。
7. 向rnase-free吸附柱cr2中加入700 μl漂洗液pw(使用前请先检查是否已加入无水乙
醇),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,将rnase-free吸附柱cr2放入
收集管中。
8. 重复步骤7。
9. 将rnase-free吸附柱cr2放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,弃收集
管,然后将rnase-free吸附柱cr2转移到新的离心管中,室温晾干5-10 min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥
太长时间,以免难以洗脱dna。
10. 在rnase-free吸附柱cr2中加入50-100 μl洗脱缓冲液tb,室温放置3-5 min, 12,000
rpm (~13,400×g ) 离心2 min,将溶液收集到离心管中。
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