影响pcr实验的因素之一、pcr耗材
在pcr实验中,影响扩增效果的因素有很多。我们能想到的有dntp的质量与浓度、模板核酸的量与纯化程度、引物的设计、dna聚合酶的浓度、扩增长度等问题。
实际上,使用的耗材也可能会影响实验结果,而这往往被我们所忽略。因此在选择实验耗材前,我们还需要了解bunsen本生pcr耗材相关的特性和术语。
如何选择合适的pcr耗材,本生简述:
1、原材料
pcr/qpcr耗材一般都是聚丙烯(pp)材质。
因其为生物学惰性材料,表面不易粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性 (可121℃高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。
2、选择合适的容积
pcr管的体积规格大多数都可以满足pcr反应要求。但是在满足实验要求的基础上,优先推荐选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时,需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而加样过少可能会造成样品蒸发损失。
大家可依据具体的实验要求选用合适的产品:
bunsen本生pcr系列(八联管,pcr板,封板膜)
bs-pcr-081-c 0.1ml 透明pcr八联管(含光学平盖) 125排/盒,10盒/箱
bs-pcr-081-m 0.1ml 乳白色pcr八联管(含盖) 125排/盒,10盒/箱
bs-pcr-082-c 0.2ml 透明pcr八联管(含光学平盖) 125排/盒,10盒/箱
bs-pcr-082-m 0.2ml 乳白色pcr八联管(含盖) 125排/盒,10盒/箱
bs-pcr-0102-cm 0.1ml/0.2mlpcr 8联排管盖, 光学平盖, 透明 125排/盒,10盒/箱
bs-pcr-96-f02-c 0.2ml 96孔pcr反应板 10块/盒,20盒/箱
bs-pcr-rfm q pcr透明热封膜 100张/盒
bs-5r-250 东千用pcr八联软管盖 250条/包
bs-d-250 冻千用pcr八联管 250条/包
3、pcr管管盖的选择
平盖与凸盖各有优势:
平盖可为qpcr提供精确的荧光信号传递;便于书写标记;合盖容易,密封性好,易于操作。
凸盖与pcr仪热盖接触,减少压力引起的反应管变形,更好的防止液体蒸发。但会影响荧光信号传递,无法应用于qpcr实验。
4、96孔板裙边的选择
无裙边板:可适用于大多数的pcr仪或qpcr仪,但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高,需要配合板托使用。
半裙边板:可适配标签或应用条码,适合自动化应用,且有着较好的移液稳定性。
全裙边板:非常适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的pcr仪,且移液过程中稳定性高。
5、根据实验选择耗材
根据检测方法的不同,耗材的选择也不同。
pcr实验分为普通pcr法和荧光定量pcr法。普通pcr法一般是终点pcr跑胶法测定,所以所用耗材的导热性和密封性和实验结果有着密不可分的关系;而荧光定量pcr是实时检测荧光信号,除了导热性和密封性外,对透光性和避光性也有所要求。
简而言之,做荧光定量pcr的耗材也可以做普通pcr,反之则不行。
导热性
导热性越好越均一,pcr的速度就越快,准确度也越高。
密封性
密封性越好,产物的挥发越少,得到的产物就越多,同时气溶胶的产生也越少,对于下一轮实验的污染也就越少,也就意味着假阳性的产生率越低。
避光性
这是针对荧光定量而言的,如果我们在整个实验过程中没注意避光,带有荧光的试剂过度被消耗,那直接就会影响我们实验的扩增效率,导致产生不准确的结果。
透光性
这也是对于荧光定量而言,我们知道它是一种实时定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少。如果选择耗材透光性良好,需要检测到的信号就会变得微弱,那就会造成我们对结果的误判。所以对于荧光定量而言,白色pcr板效果优于透明pcr板。
pcr耗材 本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。
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