pcr电泳条带图的解读方法
pcr电泳条带图的解读方法的探究 首先要从pcr的扩增原理说起：今天小编为您分析归纳，希望对您有用
pcr的原理：pcr的基本过程类似于dna的天然复制，特异性依赖于与靶序列两端互补的oligo引物。整个过程由变性-退火-延伸3个基本反应步骤构成：
1，模板dna变性：模板或经pcr扩增形成的dna经加热至94℃左右一定时间后，双链之间氢键断裂，双股螺旋解链，变成两条单链，以便它与引物结合，为下一轮反应做准备。
2，模板dna与引物的退火（复性）：dna加热变性成单链后，当温度降至一定程度（55℃左右）时，引物即与模板dna单链的互补序列配对结合。
3，引物的延伸（72℃）：在taq dna聚合酶的作用下，dna模板上的引物以dntp为原料，按a-t、c-g碱基配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板dna链互补的链。
重复上述 变性-退火-延伸 的循环过程，每一循环获得的“半保留复制链”都可成为下次循环的模板。通常每完成一个循环需时为2~4min，2~3h就能将靶核酸扩增放大上亿倍（30个循环时，靶产物数量约为10亿）。（注：pcr的第1和第2个循环，并没有短的目的片段，只是在第3个循环后才有，并且有部分双链的长片段将始终伴随整个扩增过程）
下面结合具体事例分析
pcr电泳法应用实例介绍
比如现在有一名高血压患者，我现在要做高血压个性化用药基因检测（点击查看），拟选择卡托普利进行降压，那么需要对ace i/d突变进行检测。经过引物设计（点击查看），最终的野生型目的片段约在200bp左右，由于突变型的目的片段比野生型的多了287bp的插入，那么突变型的片段约在500bp左右。
ace i/d 16号内含子中存在的287bp插入
dna经过pcr的扩增后，我们对扩增的产物进行电泳检测，dna凝胶电泳所需的标准琼脂糖浓度一般为1.0%。浓度越高，小条带的分辨率越高；反之，琼脂糖浓度越低，大分子量条带的分辨率和分离程度越高。
在电场中，中性ph值缓冲液（tae/tbe）下dna都带净负电荷并向凝胶装置正极(+)方向移动（下图中，上为“-极”至下为“+极”），dna分子越大则所受阻力越大，也越难在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢，比如500bp的dna分子比200bp的dna分子迁移就慢。
此外，电泳时需要将dna与荧光染料混匀，结合染料后，dna会在紫外灯下发出荧光，这样才会出现下图中的亮色条带，常用的染料有eb（溴化乙啶）、gel red、sybrgreen1等（有钱建议不要用eb，因为有毒）。
在电泳结束后进行结果解读，我们无法直接判断dna的长度，所以需要在电泳过程将dna产物与dna标准品（dna marker）一起跑电泳，dna marker里面含有若干种长度已知的dna（下图中出现6条亮带的就是dna marker），通过与之比较可以粗略判断dna样品的长度。同时dna marker中的dna片段浓度已知，通过与dna marker的亮度进行比较也能初步判断dna样品的浓度。
结果解读：通过与dna marker比较，如果是野生型，那么就是左边这个图，可发现dna片段长度大小约为200bp，如果是突变型，那么就是右边这个图，突变有纯合突变和杂合突变两种，中间一条500bp的条带即为纯合突变，最右边的200bp及500bp两条条带即为杂合突变，通过pcr及简单的电泳法便可准确的进行ace i/d的检测。
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2，模板dna与引物的退火（复性）：dna加热变性成单链后，当温度降至一定程度（55℃左右）时，引物即与模板dna单链的互补序列配对结合。
3，引物的延伸（72℃）：在taq dna聚合酶的作用下，dna模板上的引物以dntp为原料，按a-t、c-g碱基配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板dna链互补的链。
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