本生解析：操作细胞系步骤以及小技巧
本生解析：操作细胞系步骤以及小技巧
脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，中性脂质体是利用脂质膜包裹dna，借助脂质膜将dna导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，dna并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的dna自动结合到带正电的脂质体上，形成dna-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。
一、细胞系方法原理
细胞系方法主要包括：电穿孔法、磷酸钙沉淀法、脂质体转染法、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。
优点: 与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性，它适用于把dna转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下蕞方便的转染方法之一。
二、细胞系操作步骤
(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2ml含1~2×105个细胞培养液，37℃ co2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备：在ep管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
a液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒dna。
b液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将a液与b液轻弹混匀，静置5分钟。
(3) 吸取b液加入至a液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1ml不含血清培养液漂洗两次，再加入4ml不含血清培养液。
(5) 转染：把a/b复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者rna，验证敲减/过表达效率。
elisa试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。
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二、细胞系操作步骤
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(2) 转染液制备：在ep管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
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(3) 吸取b液加入至a液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1ml不含血清培养液漂洗两次，再加入4ml不含血清培养液。
(5) 转染：把a/b复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者rna，验证敲减/过表达效率。
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