离心机在免疫细胞上的应用
免疫细胞分离办法：
1、淋巴细胞的分离
取肝素抗凝血1m1 加hanks 液1m1 稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1 淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min 水平离心20min，管内分为4 层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用hanks 液洗两次，每次2000r／min 离心10min，zui后用rpmi l640 培养液将细胞配成2×106／m1 的细胞悬液备用。
2、t 细胞及b 细胞的分离
将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，b 细胞粘附于尼龙棉上，t细胞则不粘附，先用rpmi l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的t 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的b 细胞，并用少量的rpmi l640 培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的b 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。
3、cd4 细胞及cd8 细胞的分离
（1）cd4 细胞的分离：将一定量的t细胞悬液通过一根sephddexc—10 柱，然后用少量的rpmll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的cd4 细胞。
（2）cd8 细胞分离：用tris 缓冲液稀释羊抗鼠igg(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃，没有包被上的抗体用pbs 洗净。然后将已标记有抗cd8 单克隆抗体的t 细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用pbs 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 pbs 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在rpmi l640 培基中备用。cd4 细胞亦可用此法分离。
4、单核巨噬细胞的分离
单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃ c02 温箱内温育1 小时，然后用rpmi 1640 培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。
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2、t 细胞及b 细胞的分离
将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，b 细胞粘附于尼龙棉上，t细胞则不粘附，先用rpmi l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的t 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的b 细胞，并用少量的rpmi l640 培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的b 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。
3、cd4 细胞及cd8 细胞的分离
（1）cd4 细胞的分离：将一定量的t细胞悬液通过一根sephddexc—10 柱，然后用少量的rpmll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的cd4 细胞。
（2）cd8 细胞分离：用tris 缓冲液稀释羊抗鼠igg(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃，没有包被上的抗体用pbs 洗净。然后将已标记有抗cd8 单克隆抗体的t 细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用pbs 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 pbs 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在rpmi l640 培基中备用。cd4 细胞亦可用此法分离。
4、单核巨噬细胞的分离
单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃ c02 温箱内温育1 小时，然后用rpmi 1640 培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。
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