CS测试盒 微量酶标仪法 说明 技术 文章
柠檬酸合酶（citrate synthase，cs）活性检测试剂盒商品货号：ms1005
英文名称：micro citrate synthase(cs)assay kit
别名：柠檬酸合酶试剂盒 cs kit 柠檬酸合酶(cs）试剂盒 柠檬酸合酶(cs）测试盒,生化法试剂盒
检测方法：微量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
ms1005 -100管/48样 索桥生物 100管/48样 ￥3500.00元
测定意义：
cs（ec 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
cs催化乙酰coa和草酰乙酸产生柠檬酰*，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的dtnb转变成黄色的tnb，在 412nm处有特征吸光值。
货号：ms1005 规格：100管/96样
柠檬酸合酶（citrate synthase，cs）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
cs（ec 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
cs催化乙酰coa和草酰乙酸产生柠檬酰*，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的dtnb转变成黄色的tnb，在 412nm处有特征吸光值。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体100ml×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20ml×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5ml×1支，-20℃保存；
试剂四：液体28ml×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.2ml蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10ul 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。将匀浆600g，4℃离心5min。弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的cs（此步可选做）。在步骤④的沉淀中加入200ul试剂二和2ul 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体cs测定。测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入0.6ml无水乙醇和13ml试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）测定管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、220μl试剂五和10μl试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值a1。
（3）对照管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、220μl试剂四和10μl试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值a2。
（4）计算δa=a1-a2，每个测定管设一个对照管。
cs活性计算：
使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /mg prot）＝[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=117.6×δa÷cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w× v样÷v样总）÷t=23.8×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（500×v样÷v样总）÷t=0.0475×δa
v反总：反应体系总体积，2.4×10-4 l；ε：tnb摩尔消光系数，1.36×104 l / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.01 ml；v样总：加入提取液体积，0.202 ml；t：反应时间，2 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
使用96孔板测定的计算公式如下：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /mg prot）＝[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=235.3×δa÷cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w ×v样÷v样总）÷t=47.5×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（500×v样÷v样总）÷t=0.095×δa
v反总：反应体系总体积，2.4×10-4 l；ε：tnb摩尔消光系数，1.36×104 l / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；v样：加入样本体积，0.01 ml；v样总：加入提取液体积，0.202 ml；t：反应时间，15 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
辅酶ⅰ系列
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs）测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
ms1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 微量法 100管/96样 1550
qs1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶（nadk）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶（nadk）测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1280
ms1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 微量法 100管/96样 2500
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ms1005 -100管/48样 索桥生物 100管/48样 ￥3500.00元
测定意义：
cs（ec 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
cs催化乙酰coa和草酰乙酸产生柠檬酰*，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的dtnb转变成黄色的tnb，在 412nm处有特征吸光值。
货号：ms1005 规格：100管/96样
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微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
cs（ec 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理：
cs催化乙酰coa和草酰乙酸产生柠檬酰*，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的dtnb转变成黄色的tnb，在 412nm处有特征吸光值。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体100ml×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20ml×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5ml×1支，-20℃保存；
试剂四：液体28ml×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.2ml蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10ul 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。将匀浆600g，4℃离心5min。弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的cs（此步可选做）。在步骤④的沉淀中加入200ul试剂二和2ul 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体cs测定。测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入0.6ml无水乙醇和13ml试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）测定管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、220μl试剂五和10μl试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值a1。
（3）对照管：在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、220μl试剂四和10μl试剂六，混匀，37℃反应15min后立即测定吸光值a2。
（4）计算δa=a1-a2，每个测定管设一个对照管。
cs活性计算：
使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /mg prot）＝[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=117.6×δa÷cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w× v样÷v样总）÷t=23.8×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（500×v样÷v样总）÷t=0.0475×δa
v反总：反应体系总体积，2.4×10-4 l；ε：tnb摩尔消光系数，1.36×104 l / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.01 ml；v样总：加入提取液体积，0.202 ml；t：反应时间，2 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
使用96孔板测定的计算公式如下：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /mg prot）＝[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=235.3×δa÷cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w ×v样÷v样总）÷t=47.5×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol tnb定义为一个酶活力单位。
cs（nmol/min /104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（500×v样÷v样总）÷t=0.095×δa
v反总：反应体系总体积，2.4×10-4 l；ε：tnb摩尔消光系数，1.36×104 l / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；v样：加入样本体积，0.01 ml；v样总：加入提取液体积，0.202 ml；t：反应时间，15 min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
辅酶ⅰ系列
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs）测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
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ms1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
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qs1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶（nadk）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶（nadk）测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1280
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