PCR反应假阴性及假阳性问题可能原因及解决方法
一、假阴性（无扩增产物）
现象：正对照有条带，样品无条带
可能原因：
· 模板：含有 taq 酶抑制剂、杂蛋白，模板上样量低或模板降解
· 引物：引物降解，引物设计不合理
· 试剂：酶失活，buffer 不合适
· 反应条件：退火温度高，延伸时间短
解决方法：
· 纯化模板并重新提取，并检测模板是否含有抑制剂
· 重新设计引物并低温保存
· 优化 buffer，摸索镁离子浓度或适当加入 dmso（小于 0.3%）
· 提高退火温度，增加延伸时间（反应条件参照试剂盒说明书）
二、假阳性
现象：空白对照出现条带
可能原因：
· 引物设计不适，与目的序列具有同源性
· 试剂污染：水、移液枪等被核酸污染
· 样品间出现交叉污染
解决方法：
· 实验仪器高压灭菌
· 实验试剂（酶除外）高压灭菌，离心管枪头一次性使用
· 规范实验操作
· 假阳性可通过巢式 pcr 解决，或者使用特异性较高的试剂盒扩增
关键词：移液枪
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· 重新设计引物并低温保存
· 优化 buffer，摸索镁离子浓度或适当加入 dmso（小于 0.3%）
· 提高退火温度，增加延伸时间（反应条件参照试剂盒说明书）
二、假阳性
现象：空白对照出现条带
可能原因：
· 引物设计不适，与目的序列具有同源性
· 试剂污染：水、移液枪等被核酸污染
· 样品间出现交叉污染
解决方法：
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