填料的选择
在进行制备 hplc 时,需要选择纯度尽可能高,并可同时得到大量化合物的色谱柱。硅胶基体填充制备 hplc 色谱柱,广泛用于合成化学、天然物化学等领域。反相制备 hplc 色谱柱利用不同化学键合相保持峰型,实现高纯度精制。特别是 inertsil 系列制备 hplc 色谱柱同时具备 hplc 分析色谱柱的高分离性能和低吸附性。此外,在进行制备 hplc 时,与样品负荷量的大小、较短的色谱柱清洗时间、再平衡化时间快速化、溶剂去除的速度等相关的洗脱液的选择很重要。可全面满足上述项目要求的 inertsil ods-3 是更适于反相 hplc 制备的色谱柱。
填料
特性
inertsustain c18
耐久性*,使用强酸强碱样品及洗脱液时*使用。
inertsil ods-4
保留能力中等,理论塔板数、分离度适中。
inertsil ods-3
保留能力*,可获得大负荷量的色谱柱,制备的首要之选色谱柱。
除上述之外,也提供其他反相、正相、sec、手性制备用色谱柱。
色谱柱内径和负荷量、流量关系
制备 hplc 色谱柱的内径从 6.0mm 到 100mm 不等,可以根据使用目的及使用装置的设定流量范围不同进行选择。填料及色谱柱长度等内径以外的条件全部相同的话,流量及样品负荷量根据色谱柱的横截面积的比例调整后,几乎可以得到相同的色谱图。以下是制备 hplc 常用的制备柱内径及使用流量的总结,供大家参考。
内径
负荷量
使用流量标准(ml/min) *1
手性
备注
反相·正相
sec
hilic
4.6mm
1 倍
1
0.2~0.3
0.5
1
反相、正相、hilic、手性的规模放大研究一般使用内径4.6mm的色谱柱。
7.6-
8.0mm
2.7倍
2.7
0.5~1.0
1.4
2.7
可以用在普通分析装置上的半制备 hplc 色谱柱。用 sec 的规模放大研究一般使用内径 7.6 ~ 8.0mm的色谱柱。
10mm
5倍
5
1.0~1.5
2.4
5
14mm
9倍
9.2
1.8~2.5
4.6
-
20mm
19倍
19
3.8~5.4
9.5
19
制备 hplc 用色谱柱。由于流量范围增大,需要使用装置。而且,内径 50mm 以上的尺寸,为了使安装配管时简单化,大多采用法兰型式的色谱柱。
30mm
45倍
45
9.0~14
21
45
50mm
130倍
130
26~39
60
50
*3
100mm
240倍
480
*2
48~72
*2
120
*2
200
*3
*1:5μm 粒径柱的情况
*2:10μm 粒径柱的情况
*3:20μm 粒径柱的情况
色谱柱长度
柱长
特性
50mm 以下
主要作为制备柱的保护柱。
50~100mm
分离没有障碍的话,可实现短时间制备。
100~250mm
常用的长度。制备hplc中,*使用容易取得高理论塔板数的250mm色谱柱。
250mm 以上
制备液相为了进行高流量分析,使用粒径大于10μm、压力低的填料。由于大粒径填料不易取得高理论塔板数,在制备hplc中会使用长色谱柱弥补低理论塔板数这一缺陷。而且,尺寸排阻色谱为了达到相同目的,也会使用长柱。
制备hplc 规模放大
使用制备hplc 色谱柱研究纯化条件时,所需样品量和溶剂量多,造成成本高。所以,一般使用分析色谱柱探讨精制条件,然后规模放大到制备色谱柱。
但是,如果不使用具有与分析色谱柱同等性能的制备色谱柱,则可能会造成分离效果不佳。inertsil 即使是大口径色谱柱,峰对称性也很好,对称因子(asy)接近1,理论塔板数(n)在长度250mm 时维持着近20,000 段。因此,可顺利实现从内径4.6mm到50mm 的规模放大。
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