DNA提取的类型与基本原则

dna提取的类型与基本原则
核酸提取通常是开启生物学研究的第一步,而且提取的核酸质量高低也是决定下游实验成败的关键因素之一,那么你知道dna提取的类型与基本原则是什么吗?让我们一起来看看吧!
一、核酸提取类型:
1.总rna提取
总rna中,75-85%为rrna(主要是28s-26s/23s和18s/16s rrna),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mrna和小分子rna如trna、5s rrna、5.8s rrna、mirna、sirna、小核rna及核仁小分子rna等组成。
2.mirna提取
micrornas(mirnas)是小型的、高度保守的rna分子,如小干扰rnas(sirnas),通过与他们的碱基配对调节其同源mrna的分子表达,以预防通过各种机制的表达。他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。
3.基因组dna提取
进行基因结构和功能研究以及基因诊断,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在dna提取过程中应尽量避免使dna断裂和降解的各种因素,以保证dna的完整性,为后续的实验打下基础。
4.质粒抽提
质粒抽提方法即去除rna,将质粒与细菌基因组dna分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
二、dna提取的基本原则
1.保证dna结构的完整性
不同的下游实验对于dna结构的完整性有所区别。如pcr、southern杂交这一类实验基本保证所需片段的完整,而二代测序实验为了获得全面的序列信息对dna的完整性要求更高。
2.保证dna的纯度
去除对下游实验中酶分子有抑制作用的有机溶剂和高浓度金属离子,将蛋白质、多糖、多酚等生物大分子的污染降到低,去除其他核酸。
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