多酚氧化酶的活性检测!

多酚氧化酶的活性检测!
多酚氧化酶(,ppo)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。由于其检测方便,是被zui早研究的几类酶之一。自1883年yoghid发现日本漆树液汁变硬可能和某种活性物质相关,1938年keilin d.和mann g.研究了蘑菇多酚氧化酶的提取和纯化,得到多酚氧化酶并将这类酶称为polyphenol oxidase。多酚氧化酶又称儿茶酚氧化酶,*酶,*酶,甲酚酶,邻苯二酚氧化还原酶,是六大类酶中的第一大类氧化还原酶。
酶蛋白具有一般蛋白质的特性,在高温或低温条件下有易变性失活的特点。各类酶均有其活性的最适温度范围,一般在30c~50℃范围内酶活性*。酶若失活、变性,则就丧失了催化能力。
活性检测:
常用检压法和分光光度法。前者应用多酚氧化酶(ppo)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中的耗氧量求得ppo活性的大小,此方法设备简便,但操作复杂,误差较大。后者利用邻苯二酚和d-儿茶素在ppo催化下生成有色产物.其显色物质在460纳米处有最大吸收,吸收值在单位时间内的变化和单位酶活性成正比,计算ppo活性强度。操作方法简便,重现性好。与检压法原理相似的方法有氧电极法,应用也较多。

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