乙酰*酯酶(AchE)试剂盒 说明 技术文章

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乙酰*酯酶(acetylcholinesterase,ache)试剂盒商品货号:qs2000
英文名称:acetylcholinesterase(ache) assay kit
别名:乙酰*酯酶试剂盒 ache kit 乙酰*酯酶(ache)试剂盒 乙酰*酯酶(ache)测试盒
检测方法:常量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
qs2000-50管/48样 索桥生物 50管/48样 ¥200.00元
产品详细介绍产品说明书
测定意义:
ache属于*水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。ache催化乙酰*(ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。
测定原理:
ache催化ach水解生成*,*与二硫对硝基苯甲酸(dtnb)作用生成5-巯基-硝基苯甲酸(tnb);tnb在412nm处有吸收峰,通过测定412 nm吸光度增加速率,计算ache活性。
货号: qs2000 规格:50管/48样
乙酰*酯酶(acetylcholinesterase,ache)试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ache 属于*水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。ache 催化乙酰*(ach) 水解,在神经传导调节中起重要作用。
测定原理:
ache 催化 ach 水解生成*,*与二硫对硝基苯甲酸(dtnb)作用生成 5-巯基-硝基苯 甲酸(tnb);tnb 在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412 nm 吸光度增加速率,计算 ache 活性。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 2.6ml 试剂一,充分震荡溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 2.6ml 试剂一,充分震荡溶解。
粗酶液提取:
1. 组织:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1ml 提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
2. 细菌、真菌:
按照细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。
3. 取 1ml 玻璃比色皿,依次加入 100μ l 上清液、800 μ l 试剂一、50μ l 试剂二和 50 μ l 试 剂三,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 a1,第 190s 吸光 值记为 a2。△a 测定管=a2-a1。
注意:空白管只需测定一次。
ache 活性计算公式:
1. 组织 ache 活性
(1)按照蛋白浓度计算 活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol tnb 的酶量为 1 个酶活单位。
ache 酶活(nmol/min/mg prot)= (△a÷ε ÷d×v 反总×109 )÷(cpr ×v 样)÷t = 245×△a÷cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol tnb 的酶量为 1 个酶活单位。
ache 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△a÷ε ÷d×v 反总×109 )÷(w ×v 样÷v 样总)÷t = 245×△a÷w
2. 细菌、细胞 ache 活性
活性单位定义:每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol tnb 的酶量为 1 个酶活单位。
ache 酶活(nmol/min/104 cell)= (△a÷ε ÷d×v 反总×109 )÷(细胞数量×v 样÷v 样总)÷t = 245×△a÷细胞数量
3. 血清 ache 活性
活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol tnb 的酶量为 1 个酶活单位。
ache 酶活(nmol/min /ml)= (△a÷ε ÷d×v 反总×109 )÷v 样÷t =245×△a
ε :tnb 摩尔消光系数,13.6×103 l/mol/cm;v 反总:反应体系总体积(l),1 ml=0.001 l; 106:1mol=1×106 μ mol;v 样总:加入提取液体积,1ml;cpr:蛋白浓度(mg/ml);w:样本 质量,g;v 样:加入上清液体积(ml),0.1 ml;t:反应时间(min),3 min。
系列产品及单价
酯酶系列        
qs2000 乙酰*酯酶(ache)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 200
ms2000 乙酰*酯酶(ache)测试盒 微量法 100管/96样 380
qs2001 组织及血液酸性磷酸酶(acp)测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
ms2001 酸性磷酸酶(acp)测试盒 微量法 100管/48样 310
qs2002 组织及血液碱性磷酸酶(akp/alp)测试盒 可见分光光度法 50管/24样 160
ms2002 碱性磷酸酶(akp/alp)测试盒 微量法 100管/48样 310
qs2003 羧酸酯酶(care)测试盒 可见分光光度法 50管/48样 300
ms2003 羧酸酯酶(care)测试盒 微量法 100管/96样 590

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