2013年,在《环境与可持续发展期刊》上,埃及研究中心水污染研究部及扎加齐克大学(zagazig)微生物学系对himedia公司生产的三款显色培养基的性能进行了评估。这3款显色培养基分别为:
1)hicrome aureus agar base及添加剂
2)m-cp agar base及添加剂
3)hicrome candida differential agar及添加剂
它们分别用于检测水中的*、产气荚膜梭菌和白色念珠菌。研究人员对himedia的显色培养基的灵敏度、特异性和检测阈限进行了评估。他们总共检测了140个水的样品,包括40个地下水水样,70个尼罗河河水样本,20个废水样本,10个海水样本。分离的阳性菌落用pcr方法进行了确证。结果显示,这些显色培养基快速、特异、灵敏。
研究人员之所以开展这项研究,是因为尽管美国apha于2005年发布了水和废水检验的美国标准方法,但仍存在一些相关问题,如病原体的难以鉴定,鉴定和分型所花的时间较长,支出较多。另外,水体需要*监测病原体,这需要较好的监测方法和筛查程序。显色培养基现在已逐渐被接受,并被纳入了标准方法。显色培养基的种类和品牌也越来越多,一个显色培养基有时会采用多种显色剂,例如针对不同酶的产生绿色和红色的显色剂,这样可形成绿色、红色和紫色菌落。
在himedia这三种显色培养基中,*显色培养基在35-37℃孵育24-48小时,结果显示,*为棕黑色菌落,有透明带。m-cp培养基为厌氧培养44℃24-48小时,产气荚膜梭菌菌落为黄色菌落,并在接触氨气后30秒内变为粉红色。念珠菌显色培养基培养30℃,40-48小时,白色念珠菌为淡绿色平滑菌落。由于均为水样本,研究人员采用的是膜过滤的方法,滤膜孔径为0.45m。研究人员用无菌镊子将滤膜放到滤器上进行样本过滤,再将可能含有致病菌的水样过滤后的滤膜放到无菌平板上培养。
结果显示,对于金葡菌显色培养基的假阴性率和假阳性率均为0, 棕褐色为阴性菌;m-cp培养基上的绿色菌落为阴性菌落;念珠菌显色培养基上,每90个菌落中就有9个为浅绿色阳性菌落,假阴性有1个(假阴性率为10%),为蓝色菌落,假阳性率则为0。研究人员还发现,不存在非典型菌株显示典型菌株的典型颜色。终结论是,金葡和m-cp的灵敏度和特异性均为100%,而念珠菌显色培养基灵敏度为90%,特异性为100%。
研究人员还就140个不同水样的检测结果进行了统计,得出显色培养基对于不同水样的灵敏度和特异性,见下表:
培养基
水类型
阳性菌落
阴性菌落
灵敏度(%)
特异性(%)
(n)
真阳性n(%)
假阳性n(%)
(n)
真阴性n(%)
假阴性n(%)
*显色培养基
地下水
12
11(91.7)
1(8.3)
6
6(100)
0(0)
100
85.7
尼罗河河水
70
67(95.8)
3(4.2)
11
10(90.9)
1(8.9)
98.5
76.9
废水
20
20(100)
0(0)
13
13(100)
0(0)
100
100
海水
10
9(90)
1(10)
3
3(100)
0(0)
100
75
梭菌显色培养基
地下水
9
8(88.9)
1(11.1)
5
5(100)
0(0)
100
83.3
尼罗河河水
45
41(91.2)
4(8.8)
10
9(90)
1(10)
97.6
69.2
废水
20
19(95.0)
1(5))
5
4(80)
1(20)
95
80
海水
5
5(100)
0(0)
2
2(100)
0(0)
100
100
念珠菌显色培养基
地下水
2
2(100)
0(0)
2
2(100)
0(0)
100
100
尼罗河河水
62
60(96.8)
2(3.2)
8
7(87.5)
1(12.5)
98.4
77.8
废水
20
19(95.0)
1(5.0)
5
4(80)
1(20)
95
80
海水
13
11(84.6)
2(15.4)
4
4(100)
0(0)
100
66.7
关于检测阈限,研究人员分别用不同浓度的标准菌落掺入到水样品中测试(具体浓度包括1-20cfu/100ml、20-80cfu/100ml、80-500cfu/100ml)。结果显示,三种显色培养基的对目标微生物的检测阈限均小于20cfu/100ml,检测阈限很低。
作者认为,传统的水样病原菌的检测和计数方法非常耗时,且需要大量的确证试验。并且,仍然需要快速灵敏的水中病原微生物的检测手段,特别是对于饮用水。研究人员指出,himedia的*显色培养基,性能甚至优于市面上的科玛嘉显色培养基(科玛嘉显色培养基的灵敏度为76%,特异性为90%)。
后,作者归纳说:总之, mediad的这三款显色培养基非常适合用于常规的实验室日常工作,特别是它不需要任何的确证试验。
himedia显色培养基显色结果图(仅供参考)
图1. hicrome aureus agar base(货号m1468)
图2. m-cp agar base(货号m1354)
图3. hicrome candida differential agar(货号m1297a)
参考文献
raed s. al-wasify, al-sayed a. al-sayed and mohamed m. kamel. sensitivity and specificity of chromogenic media for detection of some pathogens in water. international journal of environment and sustainability. 2013,2(1):1-9
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