如何挑选合适的液相色谱柱？
现代液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择中。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。
硅胶基质填料:
1、正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶(silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(zh2,aps)和氰基团(cn，cps)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(sioh)或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份zui先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(hexane),氯(chloroform)二氯甲烷(methylence chloride)等。
2、反相色谱
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合zui先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有c18(ods) c8(mos)。c4(b)c6h5(phenyl)等。
聚合物填料：
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在pg值为1-14均可使用。
相对与硅胶基质的c18填料，这类填料具有更强的淑水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效教低。
其他无机填料
其它hplc的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般于特殊的用途。如墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于hplc流动相中不会被溶解，这类柱可在任何ph与温度下使用。氧化铝也可用于hplc，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在ph高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化诰填料也可用于 hplc，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化诰微球色谱柱，应用ph范围1~14，温度可达到1000c。由于氧化诰填料几年才开始研究，加之前的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。
怎样选择填料粒度
目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是*的因素。如果固定相选择是真确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而；3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
如何保证良好的柱性能与柱寿命
认证阅读色谱柱使用说明书
使用填充良好的色谱柱
尽量减少压力波动，避免机械及热冲击
使用保护柱及在线过滤器
经常以强溶剂冲洗色谱柱
充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与保强留分成
用稳定的固定相(c18zui稳定)
在中等ph纸操作(6~8)，用有机年成液溶
色谱柱使用温度小于400c
硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的ph值范围在3.0~8.0
在水流动相与缓冲浓液中加200ppm的叠氮钠
流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%
过夜或储存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存(乙晴)
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由于硅胶表面的硅羟基(sioh)或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份zui先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(hexane),氯(chloroform)二氯甲烷(methylence chloride)等。
2、反相色谱
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合zui先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有c18(ods) c8(mos)。c4(b)c6h5(phenyl)等。
聚合物填料：
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在pg值为1-14均可使用。
相对与硅胶基质的c18填料，这类填料具有更强的淑水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
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怎样选择填料粒度
目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是*的因素。如果固定相选择是真确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而；3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
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