常见缓冲溶液的种类

要用好缓冲溶液,需对不同的缓冲溶液有具体的了解。艾伟拓团队介绍几种常见的缓冲溶液及用途,为大家深入理解缓冲溶液提供参考。
1 磷酸盐缓冲溶液
由于磷酸是三元酸,因此磷酸盐缓冲溶液的缓冲对可以为h3po4/h2po4-、h2po4-/hpo42-或hpo42--po43-。但生化体系中常用的磷酸盐缓冲溶液一般主要由h2po4-/hpo42-的钠盐或钾盐配制而成。溶液中主要以h2po4-+h2o←→hpo42-+h3o+平衡移动体系来维持溶液ph值的稳定,ph值范围一般为6.2~8.2。在生化体系中,通常在其中加入nacl或者kcl构成磷酸盐缓冲生理盐水(简称pbs)来使用。
因磷酸盐缓冲溶液的ph值范围与一些生物活性物质存活的酸碱环境接近,所以在生化体系中应用较多,如可用来配置相关溶液、以及作为组织抗原修复的修复液、药物释放的溶媒等。另外,pbs作为一种溶剂目前在冷冻保存中也较受欢迎。
2 硼酸盐缓冲溶液
硼酸盐缓冲溶液中的硼酸盐常见为硼酸钠,简称硼砂,在水溶液中极易发生b4o5(oh)4-+5h2o←→2h3bo3+2b(oh)4-水解反应,生成互为缓冲对的h3bo3和b(oh)4-。常见的硼酸盐缓冲溶液有硼砂缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液。
硼砂缓冲溶液的配制是将一定质量的硼砂溶于蒸馏水中,再用盐酸调节ph值至合适值,ph值范围一般为8.0~9.0;也可用氢氧化钠调节ph值,ph值范围一般为8.0~10.8。而硼酸-硼砂缓冲溶液则一般由一定量的硼酸和硼砂溶于蒸馏水中配制而成,ph值范围一般为6.5~8.9左右。当应用于生化溶液时,需要加入一定量的nacl以维持溶液等渗。
因硼酸-硼砂缓冲液的ph值范围与泪液接近,所以在一些眼药水的制备中常作为ph值调节剂或渗透压调节剂,如普拉洛芬滴眼液的配制。而硼砂缓冲液则可作为一些药物的释放介质,如其对合(氯)霉素有助溶作用。
3 三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲溶液(tris- hcl)
三羟甲基氨基甲烷简称tris,分子式为c4h11no3,结构式见图1。分子中的氨基(—nh2)为碱性,因此tris是一种弱碱,常与盐酸构成缓冲溶液,简称tris-hcl缓冲液。该缓冲液一般由一定质量的tris溶于蒸馏水中,再用hcl调节至适合的ph值。在配制时还需加入nacl以维持溶液等渗。
因tris-hcl缓冲液的ph值受溶液浓度、温度影响较大,以及易与空气中的二氧化碳反应,所以在使用时需现用现配制。
tris-hcl缓冲液的缓冲原理为:tris中的-nh2与hcl结合生成tris·hcl盐。季铵基团tris·h+与tris形成缓冲对,溶液中存在tris·h++h2o←→tris+h3o+平衡关系,凭借该平衡移动来发挥缓冲作用。其缓冲范围一般为7.0~9.0。
由于tris对生化过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀,所以在dna、蛋白质等生物大分子实验中经常应用,tris-hcl缓冲溶液可以做dna、蛋白质的溶解液或提取液,也是dna相关研究实验中的重要缓冲液,如dna的捕获与释放、染色体的特异性标记等方面。
具体应用方面,目前已上市的新冠mrna疫苗其中一款(mrna-1273®,moderna,2020)选用tris作为缓冲体系。已上市抗体药物中也有tris的应用,如quan球shou个全人源的肿瘤坏死因子拮抗剂注射用依那西普(enbrel,恩利)。
4 羟yi基paiqin乙磺酸(供注射用)(hepes)
4-羟yi基paiqin乙磺酸(简称hepes),分子式为c8h18n2o4s。分子结构中既含有酸性的磺酸基(-so3h),又含有两个碱性叔胺氮,所以呈现两性,可用来配制两性离子缓冲液。该缓冲溶液一般由一定量的hepes溶于蒸馏水中,再用氢氧化钠调节ph至适当值。其ph缓冲范围一般为6.8~8.2。缓冲溶液的浓度以及外界温度对其ph值影响不大,因此能够较长时间维持稳定的ph值。因hepes分子中的-so3h呈现较强的酸性,易给出h+;两个叔胺氮各含有一个孤对电子,呈现碱性,可以接受h+生成季铵盐。所以磺酸基和叔胺在水溶液中互为缓冲对。而且,单个hepes分子中的叔胺和磺酸基也可传递h+生成内盐,即两性离子。在水溶液中,hepes分子、内盐以及磺酸基和叔胺各自产生的离子之间因h+或oh-的转移而能够相互转化建立平衡关系,凭借该平衡关系的移动来抵御外来酸碱的影响来调节溶液ph值稳定,所以具有缓冲作用,其平衡转化关系见下图。
hepes 缓冲溶液具有对细胞无毒性、不易穿过生物膜、不参与细胞内生化过程等特点,所以在生化实验中具有广泛的应用,如可用于开放式细胞生长、细胞的长期观察、rna 或 dna 提取试剂盒中。其次,相关研究表明以 hepes 溶液做缓冲液有利于多肽在金纳米粒子表面的偶联反应。另外,hepes 缓冲溶液对镁生物降解影响的相关实验表明,hepes 能提高镁的生物降解性以及抑制镁不溶盐层的形成。
具体应用方面,如盐酸伊立替康脂质体注射液(onivyde)。2022年4月15日,施维雅公司(servier)宣布,其胰腺癌治疗药物易安达(通用名:盐酸伊立替康脂质体注射液)获得中国国家药品监督管理局(nmpa)正式批准,与5-氟尿嘧啶(5-fu)和亚叶酸(lv)联合用于治疗接受吉西他滨治疗后进展的转移性胰腺癌患者。伊立替康脂质体注射液作为一款转移性胰腺癌治疗药物,早前已在全球多个国家和地区获批。更多信息详见《易安达(盐酸伊立替康脂质体注射液)正式获批!制剂处方,发展历程及市场前景深度分析》

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