MAPK/ERK激酶激酶15抗体抗体分子标记技术
mapk/erk激酶激酶15抗体分子标记技术：
（一）原理
当应用化学氧化法时(nai)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基,残基也可能进行化。在应用胺t( chloramine t)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把na125i和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
（二）准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/l磷酸钠缓冲液,ph7.5；无载体的na125i3.7gbq/ml(100mci/ml)的naoh液；100g/l三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺t的0.5mol/l磷酸钠缓冲液(ph7.5）；胺t反应终止缓冲液；
（三）操作要点
1.用胺t法进行化,也可在大约ph7.0的缓冲液中进行；
2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光素(fitc)偶联)胺t量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；
3. iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；
5.要注意保证所用的na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
adcy2腺苷酸环化酶2抗体
apoc3载脂蛋白c3抗体
apolipoprotein e4载脂蛋白e4抗体
ambra1自噬相关基因ambra1抗体
phospho-atg4c(ser177)磷酸化自噬相关蛋白4c抗体
phospho-atg4c(ser398)磷酸化自噬相关蛋白4c抗体
phospho-ask1 (ser966)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体
phospho-atxn1 (ser775)磷酸化失调症蛋白1抗体
atxn1/ataxin-1脊髓小脑失调症蛋白1抗体
phospho-amyloid precursor protein (thr668)磷酸化app淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-ask1 (ser967)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体
phospho-ask1 (thr845)磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体
phospho-atf2 (thr69/71)磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-atp1a1 (tyr10)磷酸化钠钾atp酶蛋白a1抗体
phospho-atp1a1 (ser16)磷酸化钠钾atp酶蛋白a1抗体
acetyl coa carboxylase乙酰辅酶a羧化酶抗体
phospho-acetyl coenzyme a carboxylase alpha (ser78)磷酸化乙酰辅酶a羧化酶抗体
phospho-ack1 (tyr859 + 860)磷酸化ack1抗体
phospho-ampk alpha-1(ser485+ser491)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
phospho-ampk beta 1 (ser108)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体
phospho-alk (tyr1604)磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
phospho-atm(ser1981)磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体
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（二）准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/l磷酸钠缓冲液,ph7.5；无载体的na125i3.7gbq/ml(100mci/ml)的naoh液；100g/l三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺t的0.5mol/l磷酸钠缓冲液(ph7.5）；胺t反应终止缓冲液；
（三）操作要点
1.用胺t法进行化,也可在大约ph7.0的缓冲液中进行；
2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光素(fitc)偶联)胺t量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；
3. iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；
5.要注意保证所用的na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；
6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
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