HPLC固定相:疏水性相互作用固定相

疏水性相互作用色谱(hic)是为了适应活性生物大分子,特别是蛋白质的分离而发展起来的一种液相色谱方法。
分离机理与反相色谱的强疏水性作为类型,但是其分离机制更多地依赖于溶质与填料表面之间弱的疏水性相互作用。hic柱填料的表面具有弱疏水性特征,在高离子强度流动相条件下,蛋白质分子中的疏水性部分与填料表面产生疏水性相互作用而被吸附,当流动相的离子强度逐渐降低时,蛋白样品则按其疏水性特征被依次洗脱,疏水性越强,洗脱的时间越长,进而实现分离。与反相色谱比较,hic方法避免了流动相中使用大量有机溶剂,能有效的保持被分离物质的生物活性,因此在生化样品的分离纯化方面被广泛采用。
常见的商品键合相hic填料基质材料包括硅胶和高聚物两种。高聚物基质包括多糖型凝胶和合成高聚物微球等。
为了提高基质表面的疏水性,可以采用键合羟丙基、甲基、丙基、丁基、苯基、戊基、苯甲基等段炼烷烃的方法,也可以在硅胶上先键合上环氧丙氧基三乙氧基硅烷,再在路易斯酸催化下接上短链烷氧基制成醚型键合相;将聚乙二醇与环氧化硅胶反相,则可制备出聚乙二醇型hic填料。

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